探讨紫檀芪在草酸诱导人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)发生内质网应激和凋亡的作用。
方法2019年1月至2020年1月，取HK-2细胞分为对照组(基础培养基培养)、草酸组(含4 mmol/L草酸的基础培养基培养)、紫檀芪干预组(含草酸4 mmol/L＋紫檀芪5、10、20 μmol/L的混合培养基共同培养)，3组细胞培养12 h后进行如下实验。CCK-8实验检测细胞活力，检测乳酸脱氢酶及抗氧化能力相关指标(还原型谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、丙二醛、过氧化氢酶、总抗氧能力)；蛋白质印迹法检测细胞内ATF6、GRP78、DDIT3、caspase12和裂解的caspase3/9的蛋白表达情况。3组在进行下述实验时，紫檀芪干预组中仅用紫檀芪浓度10 μmol/L：检测线粒体膜电位、caspase3酶活性、细胞凋亡率、活性氧水平，实时荧光定量PCR检测细胞内ATF6、GRP78、DDIT3的mRNA表达情况。
结果CCK-8实验和及乳酸脱氢酶检测结果显示，草酸组较对照组的细胞活力[(45.6±3.1)%与100.0%，P<0.001]明显下降，乳酸脱氢酶[(330.2±11.1)U/L与(92.6±6.7)U/L，P<0.001]明显上升；紫檀芪干预组(5、10、20 μmol/L)的细胞活力[(57.2±1.7)%、(67.2±3.4)%、(78.9±1.8)%]较草酸组均明显上升(均P<0.05)，乳酸脱氢酶[(288.1±4.3)U/L、(260.9±5.5)U/L、(202.6±10.2)U/L]较草酸组均明显下降(均P<0.05)。丙二醛、还原型谷胱甘肽、总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、总抗氧能力五项生化指标检测结果显示的细胞损伤状态与CCK-8和乳酸脱氢酶实验结果一致。活性氧检测结果显示，草酸组较对照组的活性氧水平(76.3±4.9与6.2±1.7，P<0.01)明显上升；紫檀芪干预组(10 μmol/L)的活性氧水平(39.5±5.4)较草酸组明显下降(P<0.01)，流式细胞术和caspase3酶活性检测结果显示3组细胞凋亡率和caspase3活性的上升趋势与活性氧水平变化趋势一致。线粒体膜电位结果显示，草酸组较对照组的线粒体膜电位(0.76±0.15与7.84±0.26，P<0.01)明显下降，紫檀芪干预组(10 μmol/L)的线粒体膜电位(2.26±0.27)较草酸组明显上升(P<0.01)。蛋白质印迹法检测结果显示，草酸组较对照组的ATF6、DDIT3、GRP78、caspase12和裂解的caspase3/9的蛋白相对表达量显著上升(均P<0.05)；紫檀芪干预组(5、10、20 μmol/L)较草酸组的ATF6、DDIT3、GRP78、caspase12、裂解的caspase3/9的蛋白相对表达量显著下降(均P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示3组ATF6、DDIT3和GRP78的mRNA表达趋势与蛋白质印迹法结果一致。
结论紫檀芪可以有效抑制草酸诱导的HK-2细胞发生内质网应激和凋亡。