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目的
构建靶向沉默甲胎蛋白(AFP)的慢病毒载体并评价沉默效果,观察沉默AFP表达对人肝癌细胞株HepG2增殖及侵袭转移能力的影响。
方法采用RNA干扰技术构建靶向沉默AFP基因的慢病毒载体,转染HepG2细胞,再用嘌呤霉素筛选获得稳定沉默细胞株。采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测肝癌细胞中AFP mRNA表达水平;Western blot检测AFP蛋白表达水平变化;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况;Transwell实验检测细胞的侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。
结果沉默组AFP在mRNA水平较空白组下降约90%(P<0.05),在蛋白表达水平下降(62.53±6.17)%(P<0.05);MTT法结果显示沉默组细胞培养6 d后,细胞增殖率下降[(31.17±1.16)%,P<0.05];Transwell实验沉默组细胞侵袭个数较空白组和阴性组降低明显,依次为(174.80±16.20)、(315.25±19.70)、(304.60±20.30)个(P<0.05);细胞划痕实验48 h后,与空白组和阴性组比较,沉默组迁移率明显抑制,分别为(54.77±9.24)%、(49.04±8.31)%、(29.96±6.79)%,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论靶向沉默AFP的慢病毒载体感染HepG2细胞能够有效抑制AFP基因的表达;AFP表达水平下降使HepG2细胞增殖、侵袭转移能力明显受到抑制。