【摘 要】
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目的以登革病毒2型(dengue virus 2, DV2)非结构蛋白(non-structrul protein 1, NS1)为靶基因,构建DV2-NS1的候选DNA疫苗;并探讨其在小鼠体内诱导特异性体液免疫和细胞免疫的作用. 方法将登革病毒2型NS1/NS2a基因片段克隆至含AG强启动子的真核表达载体pCXN2上,构建成重组体pCXN2-NS1/NS2a.在体外将重组质粒转染Cos-7细胞,
【机 构】
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中山大学中山医学院微生物学教研室,广州市疾病预防控制中心病免科
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目的以登革病毒2型(dengue virus 2, DV2)非结构蛋白(non-structrul protein 1, NS1)为靶基因,构建DV2-NS1的候选DNA疫苗;并探讨其在小鼠体内诱导特异性体液免疫和细胞免疫的作用. 方法将登革病毒2型NS1/NS2a基因片段克隆至含AG强启动子的真核表达载体pCXN2上,构建成重组体pCXN2-NS1/NS2a.在体外将重组质粒转染Cos-7细胞,间接免疫荧光检测其在真核细胞中的表达.大量提取空质粒和重组质粒,进行动物免疫实验. 结果重组质粒可在真核细胞中有效地表达NS1蛋白.免疫接种小鼠后可诱发机体产生针对NS1蛋白的特异性体液免疫和细胞免疫.末次免疫前已有抗体产生,4周后达高峰.抗体依赖补体介导的溶细胞作用(antibody-dependent complement-mediated cytolysis,ADCC)试验结果显示产生的抗体在体外具有特异的杀细胞作用.淋巴细胞增殖实验结果显示,实验组小鼠的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异有显著性.流式细胞计数仪(FACS)检测DNA免疫鼠CD4+、CD8+ T淋巴细胞变化情况,与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比,CD4+、CD8+ 细胞水平有较大升高(P<0.01).动物保护性实验结果显示,当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时,有66.6%的免疫鼠受到保护. 结论 NS1/NS2a基因重组质粒免疫小鼠可以诱发小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答.这些结果为进一步研制登革病毒DNA疫苗提供了参考依据.
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