【摘 要】
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目的 研究灵芝酸A减轻ɑ-鹅膏毒(ɑ-amanitin)诱导L02肝细胞氧化应激损伤的保护作用和机制.方法 分别用不同浓度的灵芝酸A和ɑ-鹅膏毒肽处理L02肝细胞24 h和二者最适浓度处理不同时间,挑选出二者最佳处理浓度和时间后,将L02细胞分为3组:正常组,对照组(ɑ-鹅膏毒肽处理)和实验组(ɑ-鹅膏毒肽+灵芝酸A共同处理).通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;用分光光度法检测细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的含量;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用蛋白质印迹
【机 构】
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湖南省人民医院、湖南师范大学附属第一医院,急诊科,湖南 长沙410005;湖南省人民医院、湖南师范大学附属第一医院,急危重症代谢组学 湖南省重点实验室,湖南 长沙410005;湖南省人民医院、湖南师范
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目的 研究灵芝酸A减轻ɑ-鹅膏毒(ɑ-amanitin)诱导L02肝细胞氧化应激损伤的保护作用和机制.方法 分别用不同浓度的灵芝酸A和ɑ-鹅膏毒肽处理L02肝细胞24 h和二者最适浓度处理不同时间,挑选出二者最佳处理浓度和时间后,将L02细胞分为3组:正常组,对照组(ɑ-鹅膏毒肽处理)和实验组(ɑ-鹅膏毒肽+灵芝酸A共同处理).通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;用分光光度法检测细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的含量;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用蛋白质印迹(Western blot)法检测Cleaved-多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP1)、活化的胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)、核因子E2相关因子2(NRF2)和血红素氧合酶1(HO-1)表达.结果 ɑ-amanitin能显著抑制L02细胞的活力,且抑制作用随着剂量的增加而增强(P0.05).正常组、对照组和实验组MDA含量分别为(12.73±1.35),(29.42±2.41)和(20.37±0.90)μmol·L-1;SOD活性分别为(76.21±3.16),(39.20±4.00)和(50.90±2.84)U·mL-1;GSH/GSSG比值分别为14.10±0.66,8.20±0.68和12.30±0.44;凋亡细胞百分率分别为(8.90±0.32)％,(17.20±0.68)％和(9.30±0.44)％;正常组和实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 灵芝酸A可能通过NRF2/HO-1信号通路减轻肝细胞氧化应激,防治ɑ-鹅膏毒肽所致的肝细胞损伤.
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