烟曲霉菌诱导大鼠呼吸道上皮细胞IKKα调控maspin蛋白表达的初步研究

来源 :中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fsp
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目的 研究烟曲霉诱导大鼠呼吸道上皮细胞时是否存在IκB激酶-α(IκB kinase-α,IKKα)调控maspin蛋白表达下调.方法 体外培养大鼠呼吸道上皮细胞(rat bronchial epithelial cells,REC),制备灭活的烟曲霉菌菌丝(Aspergillus fumigatus hyphae,AFH)悬液诱导REC细胞,以磷酸盐缓冲液(PBS)为对照,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测REC中maspin基因的表达,并通过免疫细胞化学技术观察maspin蛋白及IKKα在REC的表达情况.进一步制备浓度依次增高的AFH1~3悬液诱导REC细胞,Western Blot技术检测REC的maspin和IKKα蛋白表达.采用SPSS13.0软件进行方差分析和两变量的相关性分析.结果 RT-PCR检测显示AFH组与对照组的maspin蛋白的mRNA相对表达量分别为0.128±0.059和2.972±0.353,差异具有统计学意义(t=15.883 P<0.05).免疫细胞化学结果显示,maspin蛋白在两组中均表达,其中AFH组呈弱阳性,而对照组呈中度阳性,综合计分两组差异有统计学意义(t=3.721 P<0.05);IKKα显色在AFH组中度阳性,在对照组弱阳性,综合计分差异有统计学意义(t =6.825 P<0.05).Western Blot结果maspin 与β-actin的灰度比值对照组为0.912±0.023,AFH1~3组分别为0.607±0.030、0.476±0.019、0.416±0.017,组间差异有统计学意义(F=281.91,P<0.05),且任意两组比较差异均有统计学意义;IKKα与β-actin灰度比值对照组为0.624 ±0.012,AFH1 ~3组分别为0.739±0.020、0.778±0.010、0.927 ±0.017,组间差异有统计学意义(F=200.91,P<0.05),且任意两组比较差异均有统计学意义.两变量相关性分析结果显示,maspin蛋白表达与IKKα蛋白表达呈负相关关系(r=-0.911,P<0.05).结论 AFH诱导大鼠REC中IKKα表达上调并伴有maspin蛋白表达下调.
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