荧光实时定量PCR检测STAT6圈套寡核苷酸对支气管哮喘小鼠脾淋巴细胞转录IL-4 mRNA的影响

来源 :国际呼吸杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:helen_fu
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目的

研究STAT6圈套寡核苷酸(ODN)对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠脾淋巴细胞转录IL-4 mRNA的影响作用。

方法

实验细胞分组:空白组(A组)、哮喘OVA组(B组)、治疗哮喘OVA组(C组)、干扰哮喘OVA组(D组)、脂质体哮喘OVA组(E组)。设计并人工合成STAT6圈套ODN及无序ODN,全硫代修饰的ODN。用OVA和氢氧化铝复制哮喘模型,用淋巴细胞分离液分离小鼠脾淋巴细胞,体外培养后,导入由阳离子脂质体2000转染剂携带的圈套ODN进入淋巴细胞培养,抽提RNA进行反转录,建立实时荧光聚合酶链反应(PCR)反应条件,通过比较ct进行基因表达的相对定量分析。观察圈套ODN的转染对脾淋巴细胞转录IL-4 mRNA的影响。

结果

A、B、C、D、E组的IL-4 mRNA分别表达为:0.025 45±0.004 33,0.067 42±0.001 28,0.031 51±0.005 30,0.065 04±0.007 75,0.059 52± 0.005 61。A组和C组低于B组、D组和E组,其差异有统计学意义(t=6.204,P<0.01),C组和A组间差异无统计学意义(t=1.310,P>0.05),B组和D组、E组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。

结论

熔解曲线分析结果证明了PCR反应的特异性,应用SYBRG reen I实时荧光PCR可以特异、准确地分析STAT6圈套ODN能下调STAT6活性,降低转录IL-4 mRNA的表达。

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