分泌型人白细胞介素18重组质粒的构建及其真核表达

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目的构建带IL-12 P40信号肽序列的分泌型IL-18质粒,使其在真核细胞中稳定表达.方法根据IL-12 P40的信号肽cDNA序列及人成熟IL-18序列设计4条特异性引物,用RT-PCR法自人树突状细胞中分别扩增IL-12 P40信号肽序列(片段A)及成熟IL-18基因(片段B),用重叠延伸PCR法拼接和扩增融合基因(片段C),连接制备pGEM-T克隆载体,亚克隆至pcDNA3.1+.转染NCI-H460人肺癌细胞株,经RT-PCR和Western blot检测IL-18的表达.结果表达质粒的酶切图谱
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