【摘 要】
：
为探究单增李斯特菌磷脂酶PlcB在细菌感染过程中的作用及挖掘可能与宿主互作的相关蛋白,本试验利用李斯特菌遗传操作系统构建了 plcB缺失回补株及基于PlcB为诱饵的酵母双杂交
【机 构】
：
浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室,浙江杭州311300
论文部分内容阅读
为探究单增李斯特菌磷脂酶PlcB在细菌感染过程中的作用及挖掘可能与宿主互作的相关蛋白,本试验利用李斯特菌遗传操作系统构建了 plcB缺失回补株及基于PlcB为诱饵的酵母双杂交系统,并通过体外生长曲线、细胞内增殖试验、空斑形成能力等试验研究PlcB介导的生物学功能;通过酵母双杂交诱饵质粒自激活及毒性试验和诱饵蛋白表达检测等方法鉴定可以用于后续互作蛋白筛选的酵母双杂交诱饵质粒.结果显示,缺失plcB基因不影响李斯特菌的体外生长,但缺失株在RAW264.7巨噬细胞内的生存能力相较野生株显著减弱(P＜0.01),在L929成纤维细胞中感染形成的空斑较野生株和回补株极显著下降(P＜0.001).将含有pGBKT7-BD-PlcB诱饵质粒的Y2HGold酵母菌株涂布于缺陷培养基中,未发现毒性及自激活现象;通过Western blot能够检测到酵母载体中诱饵蛋白PlcB的稳定表达,说明酵母双杂交系统构建成功,并证实磷脂酶PlcB在李斯特菌宿主内感染和迁移等过程中发挥了重要作用,且基于PlcB的酵母双杂交体系可以为将来深入挖掘PlcB在感染过程中与宿主重要生物学过程及相关分子的互作交流机制奠定了基础.
其他文献
保护性耕作体系将耕作方法和种植农艺结合起来,通过避免土壤扰动以减少农田侵蚀和水分流失,增加土壤有机质,从而增加和改善健康土壤。中国的农田土壤存在肥力偏低、退化严重、水土流失、污染加剧等问题,亟待全面推行保护性耕作方法。根据中国农业生产实际情况和可持续发展需求,首先介绍了国内外在保护性耕作领域的研究进展,分析了秸秆还田、免耕少耕、虫害防治等关键技术和技术装备,并对今后开展保护性耕作技术提出了建议。我国保护性耕作推广应用面积超过7.3×107 hm2,旱田小麦—玉米
为给甘草茎秆饲用化加工机具的设计及参数优化提供理论基础,对不同直径的甘草茎秆弯曲特性、化学组分百分比含量及微观结构特征进行试验研究。通过弯曲试验得出含水率在13%~15%的光果甘草茎秆最大弯曲力为192.68 N,最大抗弯强度为539.62 MPa;随着直径的增大,弯曲力逐渐增大,而抗弯强度逐渐减小,直径对弯曲力、抗弯强度具有显著性影响(P<0.05)。采用盐酸水解法测定甘草茎秆半纤维素百分比含量为9.02%~10.71%,采用滴定法测定纤维素、木质素百分比含量分别为23.37%~38.32%、32
为构建表达传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV) VP2蛋白的基因Ⅷ型重组新城疫病毒,利用反向遗传操作系统,将IBDV强毒株的VP2基因插入到基因Ⅶ型新城
从河北省4个地区的奶牛场采集1月龄左右腹泻犊牛的新鲜粪便,通过病原的分离培养、革兰染色、生化鉴定、16S rRNA基因PCR及测序来分离和鉴定大肠杆菌;采用11种大肠杆菌O因子定
通过DNAStar Protean软件对猪德尔塔冠状病毒(porcine Deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白氨基酸序列进行分析,选取抗原性较强的区段(265～342 aa),根据大肠杆菌密码子使用的偏嗜性
以本实验室扩增的内蒙猪圆环4型病毒(PCV4)毒株的ORF2基因序列为参考,对其密码子进行优化并送往公司进行质粒合成,通过设计特异性引物,扩增出Cap蛋白基因.将目的基因克隆至pE
为制备抗犬冠状病毒(CCV)特异性单克隆抗体,以纯化的CCV为抗原免疫BALB/c小鼠4次,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞,用聚乙二醇(PEG1500)进行细胞融合,通过间接免疫荧光试验(IFA)筛选抗体阳性杂交瘤细胞。经3次克隆,获得4株能稳定分泌抗CCV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其抗体效价在体外连续传40代均稳定,命名为2H11、2G3、3E2和2B8。这些杂交瘤细胞株的细胞染色体数目均属于杂交瘤染色体组型。单抗Ig亚类鉴定结果表明,除了2H11单抗为IgG3外,其他3株单抗均为IgG1亚类。Wes
旨在探索感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)后引起继发性严重炎症反应的细菌性病原,以期为疾病的诊断、治疗和预防提供参考依据。从感染PRRSV的猪体内无菌采取胸腔积液,经菌落培养、革兰染色观察、生理生化鉴定、药物敏感性试验、16S rRNA序列比对分析和动物致病性试验,了解病原菌生长特性、菌落形态、生理生化特性、药物敏感性和致病性。结果显示,该分离菌株在普通琼脂平板呈圆形、白色小菌落,血平板呈α溶血,
旨在通过构建单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx,由lmo2344编码)的基因缺失株以研究其与渗透转运系统(OpuC)相关基因转录的调控关系.LM基
为提高河道黑臭水体修复作业的机械化程度,依据“投加微生物菌剂+鼓风曝气+投放炭纤维生态草”的黑臭水体修复技术,设计一种河道黑臭水体原位修复无人船。船体行驶系由电动机、滚珠丝杠、曲柄滑块机构、叶轮、方向舵等组成。微生物菌剂投加系统由电磁阀、搅拌电机、储液箱等组成;鼓风曝气系统由空气压缩机、电动推杆、曝气杆、电磁阀等组成;炭纤维生态草投放系统由电动机、叶片、储草箱等组成。控制及通信系统由PLC、NB-IoT等组成。岸上手机经NB-IoT与船上PLC通信,由PLC及电气设备控制各机械动作,再由各机械实现无人船行