石斛兰dfr基因的克隆、序列分析及原核表达

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二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)在不同花色形成中起着关键作用。利用RT-PCR方法从石斛兰中克隆出dfr基因,并命名为Dendfr。该序列全长1164bp,编码352个氨基酸。氨基酸序列分析发现,DenDFR与3种兰科植物的DFR氨基酸序列同源性达81%~86%,与其他非兰科植物的DFR氨基酸同源性在56%~72%之间。在DenDFRN-末端存在一个保守的NADP结合区,序列中存在26个氨基酸组成的底物特异结合区,其中134位氨基酸处存在特异的天冬酰胺N位点。将Dendfr的编码区克隆到pQE30载体中,在大肠杆菌中高效表达了该蛋白,为进一步研究石斛兰花色形成机制及花色改良基因工程打下基础。
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