【摘 要】
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目的 探讨miR-124*和laminin-8 β1链在不同恶性程度人脑胶质瘤中的表达,分析两者间潜在的表达调控关系. 方法 Western blotting、实时荧光定量PCR分别检测南方医科大学珠江医院神经外科自201 1年1月至2012年12月间手术切除并经病理证实的30例人脑胶质瘤标本和2例正常脑组织标本中laminin-8 β1链蛋白、miR-124*的表达.构建质粒载体psiCHECK
【机 构】
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南昌大学第一附属医院神经外科, 南昌,330006;广州医科大学荔湾医院风湿科, 广州,510170;南方医科大学珠江医院神经外科, 广州,510282;
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目的 探讨miR-124*和laminin-8 β1链在不同恶性程度人脑胶质瘤中的表达,分析两者间潜在的表达调控关系. 方法 West blotting、实时荧光定量PCR分别检测南方医科大学珠江医院神经外科自201 1年1月至2012年12月间手术切除并经病理证实的30例人脑胶质瘤标本和2例正常脑组织标本中laminin-8 β1链蛋白、miR-124*的表达.构建质粒载体psiCHECKTM-2-野生型(WT) laminin β1链3非翻译区(3UTR)和psiCHECKTM-2-突变型(MUT)laminin β1链3UTR,分别同miR-124*模拟物、miRNA模拟物阴性对照;miR-124*抑制剂、miRNA抑制剂阴性对照共转染至U87细胞中,转染空载体psiCHECKTM-2作为空白对照.转染48 h后采用双荧光素酶报告检测系统检测各组细胞的荧光强度.nu/nu裸鼠皮下注射U87细胞构建胶质瘤动物模型,miR-124*模拟物原位注射治疗3周后West blotting检测肿瘤中laminin-8 β1链蛋白表达,免疫组化染色观察血管内皮细胞标记物CD31的表达. 结果 West blotting显示Laminin-8蛋白在高级别胶质瘤(WHOⅢ/Ⅳ级)中呈现高表达,而在低级别胶质瘤(WHO Ⅰ/Ⅱ级)中表达不明显;实时荧光定量PCR显示miR-124*在正常脑组织、WHO Ⅰ级、Ⅱ级、高级别胶质瘤中表达依次降低,差异有统计学意义(P＜0.05).双荧光素酶报告实验显示,与psiCHECKTM-2-WTlaminin β1链3UTR质粒共转染时,miR-124*模拟物组荧光强度(2.13±0.25)明显弱于miRNA模拟物阴性对照组(2.71±0.08),而miR-124*抑制剂组(3.18±0.22)明显强于miRNA抑制剂阴性对照组(2.70±0.17),差异有统计学意义(P＜0.05).动物模型实验结果提示miR-124*治疗组较对照组肿瘤laminin-8 β1链及CD31表达均明显降低. 结论 miR-124*通过负调控laminin-8 β1链的表达影响胶质瘤的恶性程度,可作为诊断治疗胶质瘤的靶基因.
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