【摘 要】
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目的 构建DJ-1 shRNA真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人肝癌HepG2细胞株.方法 合成DJ-1基因干扰序列,定向插入真核表达载体pGenesil-1质粒并测序鉴定;干扰质粒经脂质体介导转染人肝癌HepG2细胞,G418(450 mg/L)有限稀释法持续筛选8周后,扩增获得稳定转染的细胞株;荧光显微镜观察转染扩增效率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测稳
【机 构】
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430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科,430030,
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目的 构建DJ-1 shRNA真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人肝癌HepG2细胞株.方法 合成DJ-1基因干扰序列,定向插入真核表达载体pGenesil-1质粒并测序鉴定;干扰质粒经脂质体介导转染人肝癌HepG2细胞,G418(450 mg/L)有限稀释法持续筛选8周后,扩增获得稳定转染的细胞株;荧光显微镜观察转染扩增效率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测稳定转染细胞株的DJ-1 mRNA和蛋白的表达.结果 测序证明DJ-1干扰序列及读码框完全正确,G418筛选后扩增细胞中稳定转染扩增百分率高达75.00%.稳定转染细胞DJ-1mRNA表达下调,DJ-1蛋白抑制率为98.78%(P＜0.05).结论 成功构建DJ-1 shRNA真核表达载体,DJ-1 shRNA质粒稳定转染HepG2细胞株的建立,为以DJ-1基因为靶点的人肝癌基因研究提供实验基础。
其他文献
我院2005年以来采用可吸收缝线张力带环扎绑扎法治疗髌骨骨折57例,现报道如下。一、对象与方法1.一般资料:2005年8月至2011年3月收治闭合性有手术指征(根据X线表现)的髌骨骨折共114例,随机分成可吸收缝线张力带及环扎绑扎法治疗组患者57例(观察组Ⅰ),克氏针钢丝张力带固定治疗组患者57例(对照组Ⅱ),两组病例均得到随访,随访时间6～18个月。组Ⅰ 57例,男39例,女18例,年龄(45.
乳腺癌细胞的增殖和侵袭转移仍然是导致患者预后不良的重要因素,明确乳腺癌的增殖和侵袭转移机制有助于找到针对其更好的治疗方法.我们应用磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号通路抑制剂LY294002和Wortmanin处理乳腺癌细胞株MCF-7,以MTT和Transwell法检测处理后MCF-7细胞的增殖和侵袭力变化,探讨乳腺癌细胞中潜在活化的PI3K信号通路对其增殖和侵袭力的影响及意义。
心肌梗死是威胁人类生命的严重疾病之一.我们在已往心肌梗死动物模型的基础上加以改进,采用微创的方法建立了比较稳定的家兔心肌梗死模型,结扎左冠状动脉前降支(LAD)所致家兔心肌梗死与临床上单只冠脉阻塞形成的心肌梗死相似[1]。
凋亡是脑缺血后神经元丢失的重要途径,抑制神经元凋亡是目前治疗脑缺血损伤的研究热点[1]。本研究旨在观察吗啡对海马神经元凋亡的影响,探讨吗啡是否具有脑保护作用及可能的作用机制。一、材料与方法1.动物及分组:健康成年雄性Wistar大鼠72只,随机分为假手术组、模型组、吗啡低剂量和高剂量组,各18只。2.造模方法及干预措施:模型组、吗啡组大鼠参考Pusinelli法建立脑缺血模型:俯卧位下用烧灼器烧闭
我们通过Taurolidine作用于多形性胶质母细胞瘤(GBM)细胞,观察其对GBM细胞增殖及细胞周期的影响,探讨其诱导抑制的机制. 一、材料和方法 1.材料:DMEM培养基、胎牛血清均为美国Gibco公司产品;噻唑蓝(MTT)为Sigma公司产品. 2.方法:(1)MTT测定Taurolidine对GBM细胞存活及增殖的影响:GBM胶质瘤细胞株LN18(由瑞士苏黎世大学神经外科实验室提供)
树突状细胞(DCs)是体内最重要的抗原递呈细胞(APC),其最重要的特点就是能够刺激初始型T细胞增殖,是机体免疫系统反应的启动者,在免疫应答过程中起着重要的作用,同时DCs在诱导免疫耐受中起重要作用,是诱导外周免疫耐受的调控点[1].而近年来在免疫学领域的另一研究热点则是对调节性T细胞(Tr)的研究.Tr细胞是外周免疫耐受新的重要作用机制,它可通过细胞接触或者抑制性细胞因子作用于APCs或效应性T
本研究旨在探讨CD151与上皮间皮转化重要标记E-cadherin两者在肝癌中的关系,现报道如下. 一、资料与方法 1.材料:细胞株购自中国科学院上海生物所.pGCSIL-shRNA-CD151、pGCSIL-cDNA-CD151由复旦大学附属中山医院肝癌研究所樊嘉教授惠赠[1].引物由上海申能博彩生物有限公司合成。
乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率不断上升.根据美国2010年发布的数据,2009年全美女性新发乳腺癌病例以207090例高居榜首,大大超过第2位消化系统肿瘤125 790例,死亡共39 840例;而男性也有1970例新发病例.随着工业化发展,我国乳腺癌发病率、死亡率在不断上升,并呈现出年轻化的趋势.另一方面,随着乳腺癌早期诊断和治疗实验研究的进一步发展,以基因工程、蛋白质组学、生物
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