目的构建轮状病毒（rotavirus， RV）非结构蛋白4（nonstructural protein 4， NSP4）和其第86～175位氨基酸肽段（86 to 175 amino acid peptide of nonstructural protein 4， NSP486-175）基因的原核表达系统，初步证实重组表达产物的生物学活性。方法胶体金法筛选A组轮状病毒抗体阳性粪便，提取病毒RNA并逆转录为cDNA，PCR扩增出NSP4和NSP486-175基因，插入到表达载体pET-28a （＋）。构建pET-28a（＋）-NSP4和pET-28a（＋）-NSP486-175原核表达载体，转化E．coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，Ni-NTA亲和层纯化及Western blot 鉴定。 Fluo-3 AM标记Caco-2细胞内游离的Ca2＋（ in-trancellular calcium，[Ca2＋]i），激光共聚焦显微镜检测NSP486-175蛋白对[Ca2＋]i的效应。结果 NSP4和NSP486-175 DNA测序结果与 NCBI 中相关基因一致。完整的 NSP4在大肠埃希菌中难以表达。NSP486-175蛋白主要以可溶性方式存在，相对分子质量为10000。外源性添加NSP486-175蛋白至Caco-2细胞荧光强度和分布改变。结论构建了pET-28a（＋）-NSP4和pET-28a（＋）-NSP486-175表达载体，目的蛋白能够导致细胞内游离的Ca2＋失衡，初步证实具有生物学活性，可进一步用于轮状病毒致病机制及疫苗的相关研究。