【摘 要】
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[目的]对来自羊鲍肠道中弧菌(Vibrio sp.YBCH1_8)的褐藻胶裂解酶基因val1进行异源表达并研究其酶学性质.[方法]采用PCR技术获得褐藻胶裂解酶基因val1,分析基因序列,构建重组
【机 构】
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武汉轻工大学生物与制药工程学院,湖北武汉430023;自然资源部第三海洋研究所,自然资源部海洋生物遗传资源重点实验室,福建厦门361005;自然资源部第三海洋研究所,自然资源部海洋生物遗传资源重点实验
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[目的]对来自羊鲍肠道中弧菌(Vibrio sp.YBCH1_8)的褐藻胶裂解酶基因val1进行异源表达并研究其酶学性质.[方法]采用PCR技术获得褐藻胶裂解酶基因val1,分析基因序列,构建重组质粒pET-VAL1并在大肠杆菌中实现异源表达,经纯化后对其酶学性质进行研究.[结果]重组酶rVAL1最适温度为30℃;最适pH为8.5,在pH 4.5～10.0范围内保温30 min仍能保持50％以上的相对酶活力;对海藻酸钠具有良好的底物特异性;Mn2+和Co2+对rVAL1酶活具有明显促进作用,而Fe2+、Fe3+、SDS和EDTA对rVAL1活性抑制作用明显;rVAL1动力学参数Km值为2.23 mg/mL,Kcat为3.28s-1,Vmax为21.70 mg/(mL·min);薄层层析分析显示,VAL1降解终产物主要是单糖组分,推测其属于外切型褐藻胶裂解酶.[结论]成功对褐藻胶裂解酶基因val1进行外源表达,研究发现VAL1是一个PL7家族中具有适冷性的外切型褐藻胶裂解酶,最适条件下比酶活为6.6 U/mg.
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