【摘 要】
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利用发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）Ｒｉ质粒介导的二元载体法，将ｐＢＴＣ－８质粒上的ＴＭＶ－ｃｐ和ＣＭＶ－ｃｐ基因导入烟草中。采用烟草叶片与农杆菌菌液共培养的方法，诱导出毛状根，经卡那霉素抗性筛选，进一步诱导出愈伤组织并分化再生出
【机 构】
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哈尔滨师范大学生物系,牡丹江师范学院生物系
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利用发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）Ｒｉ质粒介导的二元载体法，将ｐＢＴＣ－８质粒上的ＴＭＶ－ｃｐ和ＣＭＶ－ｃｐ基因导入烟草中。采用烟草叶片与农杆菌菌液共培养的方法，诱导出毛状根，经卡那霉素抗性筛选，进一步诱导出愈伤组织并分化再生出完整植株，转化根和植株表现卡那霉素抗性并检测到冠瘿碱的存在。ＰＣＲ扩增和ＤＮＡ斑点杂交的结果证明了ＴＭＶ和ＣＭＶ外壳蛋白基因已导入到烟草中，同时利用斑点免疫结合法的血清学实验，检测到转化株中有ＴＭＶ－ｃｐ和ＣＭＶ－ｃｐ基因的产物，从而进一步证明了ＴＭＶ－ｃｐ和ＣＭＶ－ｃｐ基因在转化的烟草中得到表达。
The TMV-cp and CMV-cp genes on the pBTC-8 plasmid were introduced into tobacco using the binary plasmid method mediated by Ri plasmid of Agrobacterium rhizogenes. The method of co-culturing tobacco leaves with Agrobacterium tumefaciens induces the hairy roots and the kanamycin resistance is selected to further induce the callus and to differentiate and regenerate the whole plant. The transformed roots and plants show kanamycin Resistant and detected the presence of opine. As a result of PCR amplification and DNA spot hybridization, it was confirmed that the TMV and CMV coat protein genes were introduced into tobacco and the products of the TMV-cp and CMV-cp genes in the transformants were detected by the serological assay of dot immunoblotting , Further demonstrating that TMV-cp and CMV-cp genes are expressed in transformed tobacco.
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