【摘 要】
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为了解析非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pO174L蛋白的功能,根据ASFV HLJ/18毒株基因序列(GenBank登录号:MK333180)设计引物,扩增O174L基因并克隆至pET-28a(+)载体中,构建原核表达载体pET-28a-O174L,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达后,通过镍柱亲和层析纯化目的蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定重组蛋白表达产物的抗原性,用重组蛋白免疫新西兰大白兔制备
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所国家非洲猪瘟区域实验室(兰州)家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州 730046;中国农业科学院兰州兽医研究所国家非洲猪瘟区域实验室(兰州)家畜疫病病原生物学国家重点
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为了解析非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pO174L蛋白的功能,根据ASFV HLJ/18毒株基因序列(GenBank登录号:MK333180)设计引物,扩增O174L基因并克隆至pET-28a(+)载体中,构建原核表达载体pET-28a-O174L,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达后,通过镍柱亲和层析纯化目的蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定重组蛋白表达产物的抗原性,用重组蛋白免疫新西兰大白兔制备家兔抗pO174L蛋白的多克隆抗体;利用间接ELISA方法测定多克隆抗体的效价,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定多克隆抗体的特异性.结果显示,用PCR扩增的O174L基因片段长564 bp,与预期相符;双酶切和测序鉴定结果证明,重组质粒pET-28a-O174L构建成功,在原核表达系统成功地表达并获得了可溶性蛋白pO174L,分子质量约为21.5 ku;用纯化的蛋白免疫动物后制备了多克隆抗体,抗体效价达到1:512 000;Western-blot和IFA结果显示制备的抗体能够特异性地识别ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的天然蛋白pO174L.本研究为深入解析pO174L蛋白的功能及其在ASFV感染和致病过程中的作用奠定了基础.
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Dear Editor,rnThe coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic presents a severe threat to public health and the global economy and the direct origin of the causative agent severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2)remains unresolved (WH
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目的:探究可乐定透皮贴片治疗儿童中重度抽动障碍的临床治疗效果.方法:资料选取2018年2月至2020年2月收治的80例中重度抽动障碍患儿作为本次的研究对象,采用随机数表法将其平均分为两组,对照组患儿给予常规药物治疗,观察组患者采取可乐定透贴片进行治疗,治疗8周后比较两组患儿的抽动改善率、运动功能改善情况以及不良反应发生率.结果:对两组中重度抽动障碍患儿实施不同治疗方案后,观察组抽动障碍患儿的抽动改善总有效率明显高于对照组患儿,分别为97.50％ 和85.00％,P<0.05;观察组抽动患儿的运动功能改善水
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