【摘 要】
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为了通过比较培养筛选出能改进和提高山羊卵母细胞体外成熟效率的培养体系,培养的山羊卵母细胞以TCM-199为基础培养液,添加:(1)10%血清(胎牛血清(FBS)或发情山羊血清(EGS))+2
【机 构】
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西北农林科技大学,中国农业大学,宁夏大学
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为了通过比较培养筛选出能改进和提高山羊卵母细胞体外成熟效率的培养体系,培养的山羊卵母细胞以TCM-199为基础培养液,添加:(1)10%血清(胎牛血清(FBS)或发情山羊血清(EGS))+20 mg/L促黄体素(LH)+10 mg/L促卵泡素(FSH)+1 mg/L雌二醇(E 2);(2)10%EGS+促性腺素(LH:FSH=5 mg/L:0.5 mg/L或20 mg/L:10mg/L)或者0.075 IU/mL人绝经期促性腺素(HMG)+1 mg/L estradiol 17β;(3)10% EGS+0.075 mg/L HMG+10～20μg/L EGF.此外,以M199+10%EGS+0.075 mg/L HMG+10～20μg/L EGF为培养基,溶解于自制超纯水或储存的商品化超纯水来培养卵母细胞.培养条件为38℃,5%CO2.培养24 h后,在体式显微镜下统计处于MⅡ期的卵母细胞比例.结果显示:在卵母细胞成熟液中添加10%EGS比10%FBS的成熟培养效果好;添加HMG能够促进卵母细胞的成熟,其效果比添加不同比例的LH/FSH好;成熟液中添加10～20μg/L EGF能促进卵母细胞的成熟,但成熟率没有明显提高;新鲜的超纯水对于卵母细胞的培养是必要的.结论:新鲜超纯水配制的M199+10%EGS+0.075 IU/mL HMG+10～20μg/L EGF培养液可以获得最佳卵母细胞培养效果.
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