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目的 建立稳定表达野生型CPⅡ b/Ⅲa和突变型GPⅡb/Ⅲa^T1565C的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,探讨GPⅡb/Ⅲa^T1565C点突变对黏着斑激酶(FAK)磷酸化的影响。方法采用脂质体介导基因转移法将真核表达载体pcDNA3.1(+)Ⅱb分别与pcDNA3.i(+)Ⅲa或pcDNA3.1(+)Ⅲa^T1565C共转染到CHO细胞中,经C,418筛选出稳定表达野生型GPⅡb/Ⅲa和突变型GPⅡb/Ⅲa^T1565C的CHO细胞系。流式细胞术(Flowcytom—etry,FCM)检测野生型和突变型GPⅡb/ⅢaCHO细胞表面CD41和CD61的表达。免疫沉淀、免疫印迹(Westernblot)和FCM细胞内染色等方法检测野生型和突变型GPⅡb/ⅢaCHO细胞经纤维蛋白原(Fbg)激活后发生的FAK酪氨酸磷酸化和丝氨酸磷酸化。结果野生型和突变型GPⅡb/ⅢaCHO细胞表面CD41和CD61均高效表达,分别为97.19%和99.71%。免疫沉淀、Western blot检测结果显示,野生型和突变型GPⅡb/ⅢaCHO细胞经Fbg激活90min后,分别有16.24%和20.44%的FAK发生酪氨酸磷酸化;FCM细胞内染色检测结果显示,经Fbg激活90min后,野生型和突变型GPⅡb/ⅢaCHO细胞均不发生FAK丝氨酸磷酸化;激活48h后,野生型和突变型GPⅡb/ⅢaCHO细胞分别有34.89%和73.84%发生FAK丝氨酸磷酸化。结论成功构建稳定表达野生型GPⅡb/Ⅲa和突变型GPⅡb/ⅢaaT1565C托的CIIO细胞系。GPIU/ⅢaaT1565C点突变能够增强FAK酪氨酸磷酸化和丝氨酸磷酸化,因此可能增强GPⅡb/Ⅲa介导的细胞外向内信号转导功能。