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目的开发一种快速构建RNA干扰（RNAi）质粒载体的方法。方法以pBluescriptⅡ质粒载体为母体，逆向导入人U6和H1启动子序列，仅用两条互补的寡核苷酸链，可快速构建单靶基因位点RNAi质粒载体；利用RNAi表达框两侧的MunⅠ及EcoRⅠ酶切位点，将多个干扰表达框串联，可快速构建多靶基因位点RNAi质粒载体；根据以上原则，构建针对绿色荧光蛋白（GFP）基因和萤火虫荧光素酶（LUC）基因的单靶点及双靶点RNAi质粒载体，以检测其干扰效果。结果构建的RNAi质粒载体可产生较理想的干扰效果，单靶点RNA