【摘 要】
：
目的构建表达大鼠TLR4siRNA的腺病毒,并观察对内毒素诱导的大鼠肺泡巨噬细胞TLR4的抑制和TNF-α、IL-10释放的影响。方法合成双链寡核苷酸并克隆入pShuttleH1载体,pShuttleH1
【机 构】
：
解放军第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科,解放军胸心外科研究所,解放军第二军医大学长海医院麻醉科
论文部分内容阅读
目的构建表达大鼠TLR4siRNA的腺病毒,并观察对内毒素诱导的大鼠肺泡巨噬细胞TLR4的抑制和TNF-α、IL-10释放的影响。方法合成双链寡核苷酸并克隆入pShuttleH1载体,pShuttleH1-TLR4线性化后电转化到含pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中获取重组质粒,重组质粒用脂质体转染293细胞获取重组腺病毒Ad-siTLR4;扩增、纯化腺病毒,TCID50法测定病毒滴度。原代培养大鼠肺泡巨噬细胞,腺病毒Ad-siTLR4感染后加入内毒素,采用RT-PCR和Western blot观察TLR4蛋白及mRNA的表达,ELISA检测TNF-α、IL-10的释放情况。结果目的基因序列正确并成功克隆入腺病毒,腺病毒Ad-siTLR4滴度为5.72×109pfu/mL。转染腺病毒后的内毒素诱导的肺泡巨噬细胞TLR4蛋白和mRNA水平下降,TNF-α、IL-10的表达均明显减弱。结论本研究成功构建了表达大鼠TLR4 siRNA的腺病毒,具有良好的抑制TLR4和TNF-α、IL-10的作用,为下一步动物体内实验基因治疗急性肺损伤奠定良好的基础。
其他文献
目的:探讨下肢骨折合并深静脉血栓患者腔静脉滤器置入术后并发症的观察及护理方法。方法:选取我院2013年1月~2016年6月实施腔静脉滤器置入并抗凝、溶栓治疗患者80例,针对主要
测土配方施肥技术在湖北省咸丰县清坪镇已经连续开展了几年,按照测土配方施肥节肥增效和测土配方施肥普及行动工作要求,清坪镇在湖北省排丰坝村实施测土配方施肥活动中,积极
<正>探索规律性的问题是中考的热点问题.此类问题能比较系统地考查学生的逻辑推理能力,归纳猜想能力,以及运用所学知识和方法分析、解决数学问题的能力.规律探索问题由于具备
近年来,中小企业在扩充就业机会、增加财务收入、促进社会和谐等方面占据了越来越重要的地位。但是由于自身的不足、政府政策缺乏统领性以及银行设置的“高门槛”等因素,融资
介绍了某烯烃联合生产装置区污水处理场挥发性有机物废气(VOCs)的主要来源、废气中污染物的类别及排放浓度。通过不同废气处理工艺的比选,有不同的优缺点。本水场采用生物洗
<正>党的十八大以来,习近平总书记多次就法治建设发表重要讲话,指明了社会主义法治国家建设的方向,并对推进依法行政、建设法治政府提出了明确要求。深入推进转变政府职能、
T细胞免疫球蛋白黏蛋白3（T cell immunoglobulin domain mucin-3,TIM-3）是TIM家族的重要成员,可与其配体半乳凝素-9（Galectin-9,Gal-9）结合负调控T细胞免疫应答。TIM-3和Gal-9异
患者，男，73岁，2001年2月因前列腺增生在合肥某医院住院治疗时发现腹部包块并行手术切除，术后病理示小肠平滑肌肉瘤，分别于2001年3月、4月、5月化疗3次，前2次方案为ADM＋IFO，第3次为IFO
以重庆市黔江区石家镇地的烤烟种植为研究对象,探讨了重庆山地烟草种植过程中采用轮作方式对烟叶质量的影响作用,实验表明:采用轮作方式能够有效提高重庆地区烟叶种植的烟草