抑制Akt活化对人结肠癌细胞c-FLIP基因表达的作用

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目的:探讨结肠癌细胞中抑制蛋白激酶B(PKB/Akt)的活化对c-FLIP基因表达的调控作用.方法:取对数生长期的HT-29细胞系,分别采用10、20和40nmol/L的Akt活化特异性抑制剂wortmannin对其进行干预,运用MTT法检测不同干预时间点的细胞增殖抑制情况.采用40nmol/L的wortmannin干预HT-29细胞0,3,6,12,24h后,采用Westernblot检测磷酸化Akt和c-FLIP蛋白表达水平,逆转录PCR检测c-FLIP基因的转录水平.结果:三个浓度的wortmannin都对HT-29细胞的生长具有抑制作用,随着浓度、时间的递增,其抑制效应逐渐增强(P<0.01或0.05),而对照组未见明显变化(P>0.05).随着wortmannin的干预时间延长,磷酸化Akt蛋白的表达水平明显降低,同时c-FLIP蛋白的表达水平也随之下降,24h后二者表达水平分别下降了82%和91%.wortmannin干预HT-29细胞3h后,与对照组相比其c-FLIPmRNA表达水平已明显下降到40%,24h后其表达水平下降到25%.结论:Akt活化的特异性抑制剂wortmannin可抑制体外培养的结肠癌HT-29细胞的生长,结肠癌中可能存在Akt/c-FLIP信号通路调节c-FLIP基因的表达.
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