论文部分内容阅读
[摘要] 目的 探讨核苷酸结合寡聚域（NOD）样受体在哮喘发病机制中的作用。 方法 采用哮喘大鼠模型分离提纯血中性粒细胞（PMN），实时荧光定量PCR法检测PMN NOD2和NALP1 mRNA的表达。 结果 哮喘组NOD2 mRNA的表达量（3.11±0.82）显著高于对照组（P<0.01），地塞米松组NOD2 mRNA的表达量（1.30±0.28）显著低于哮喘组（P<0.01）。哮喘组NALP1 mRNA的表达量（0.51±0.21）显著低于对照组（P<0.01），地塞米松组NALP1 mRNA的表达量（0.91±0.26）显著高于哮喘组（P<0.05）。血PMN NOD2和NALP1 mRNA 的表达水平呈显著负相关性（n=24，r=-0.74，P<0.01）。 结论 哮喘大鼠血PMN NOD2 mRNA的表达升高，NALP1 mRNA的表达则相反，地塞米松具有调节模式识别受体的作用。
[关键词] 哮喘；模式识别受体；NOD样受体；地塞米松；发病機制
[中图分类号] R562.25 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）28-0039-03
哮喘的发病机制十分复杂，涉及多种炎症细胞和炎症因子[1]，嗜酸性粒细胞被认为是最主要的炎症细胞之一[2]。中性粒细胞（polymorphonuclear，PMN）也是众多炎症细胞中的一种，尤其在非嗜酸性粒细胞表型的哮喘、糖皮质激素治疗不敏感和重度哮喘中PMN所起的作用越来越被人们所重视[3，4]。在哮喘急性期，PMN被激活，它能分泌多种炎症因子和蛋白酶类参与哮喘的炎症机制[3，4]，但其参与哮喘炎症的机制至今尚未完全清楚。模式识别受体是一类介导天然免疫和继发性免疫的识别受体，目前认为模式识别受体与哮喘的炎症机制密切相关[5]。核苷酸结合寡聚域（nucleotide-binding oligomerization domain，NOD）2和NALP（NACHT、LRR和PYD domains-containing protein，NALP）均属于NOD样受体家族成员，为细胞内模式识别受体，参与细胞内信号传导，与机体的抗感染、肿瘤、关节炎和炎症性肠病等多种疾病的发病机制有关[6，7]。但NOD样受体家族在哮喘炎症机制中的作用如何目前知之甚少。本研究通过观察哮喘大鼠PMN NOD2和NALP1的表达，探讨哮喘的发病机制，为哮喘的防治提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 一般材料
清洁级健康雄性SD大鼠24只，4～5周龄，平均128 g，由杭州师范大学动物实验中心提供，实验动物合格证号：SCXK（浙）20140001。
1.2 主要试剂
Ⅴ级鸡卵白蛋白（ovalbumin，OVA）和Histopaque 1119及1083分离液均购自美国Sigma公司。
1.3 分组及模型制备
大鼠饲养于杭州师范大学动物实验中心，自由进食和饮水，温度20℃，湿度50%。共24只，随机平均分为三组，命名为哮喘组、对照组、地塞米松组。采用OVA致敏的方法复制哮喘模型[8]。具体方法为：第1天和第8天腹腔注射OVA/氢氧化铝混合液2 mL（含OVA 1 mg和氢氧化铝100 mg）致敏，各1次。第15天开始每天向大鼠喷雾（空气压缩雾化器：德国百瑞公司生产）1% OVA 30 min，连续激发14 d。地塞米松组在OVA雾化激发开始前一天至雾化结束止，每日1次给予腹腔注射地塞米松1 mg/只，共15 d。哮喘大鼠主要症状为搔痒、抓鼻、躁动、喘鸣、呼吸加快、腹肌抽搐、毛发逐渐变黄及无光泽等。
1.4 血PMN分离提纯和肺组织标本的制备
末次激发24 h后，水合氯醛腹腔注射麻醉，心脏抽血4 mL，采用Histopaque分离液行密度梯度离心，分离提纯血PMN[9]，0.1M PBS洗涤，台盼蓝查细胞活力，瑞氏染色查PMN纯度为90%。取左肺门组织，多聚甲醛固定、切片、HE染色，光镜下观察肺组织病理改变。
1.5 Rt-PCR法检测血PMN NOD2和NALP1 mRNA的表达
采用Trizol-离心柱法提取总RNA，然后转录成cDNA。测定RNA的反应体系（购自上海捷瑞生物工程有限公司）共20 μL，25℃干浴5 min、42℃干浴60 min、70℃干浴5 min终止反应，-80℃保存cDNA。20 μL反应液为：特异性PCR引物各0.3 μL、cDNA模板2 μL、灭菌超纯水7.4 μL、SYBR 10 μL。95℃15 min、95℃ 10 s、60℃ 20 s、72°C 20 s（39循环），增量0.5°C 10 s。基因序列见表1，结果分析采用比较CT值法：△△CT=（CTNOD2/NALP1-CTβ-actin）实验组-（CTNOD2/NALP1-CTβ-actin）对照组，基因相对表达量（RQ）采用2-△△CT方法计算。
1.6 统计学方法
采用SPSS16.0统计学软件，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，Homogeneity of Variances行方差齐性分析，多组间比较采用秩和检验，两变量相关分析采用直线相关分析法，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 肺组织病理变化
HE染色显示：哮喘组见黏液腺增生，支气管腔见较多黏液分泌物，部分管腔有黏液栓，支气管上皮细胞增生，较多炎性细胞浸润，支气管腔旁见聚集的淋巴细胞。对照组肺组织细胞清晰，结构完整，炎症细胞和支气管腔内分泌物少。地塞米松组肺组织炎症细胞和炎症分泌物较哮喘组减少（封三图1）。
2.2 血PMN NOD2和NALP1 mRNA的表达
抽提物总RNA的A260/A280比值在1.8～2.0之间，目的基因NOD2、NALP1及内参基因β-actin的溶解曲线均为单一峰，基因扩增曲线呈标准S型，溶解温度依次为90.5℃、79℃、87℃。NOD2和NALP1 mRNA的表达量均方差不齐，采用秩和检验。 哮喘组NOD2 mRNA的表达量显著高于对照组（P<0.01），地塞米松组NOD2 mRNA的表达量显著低于哮喘组（P<0.01）。哮喘组NALP1 mRNA的表达量显著低于对照组（P<0.01），地塞米松组NALP1 mRNA的表达量显著高于哮喘组（P<0.05）（表2）。
2.3 相关性分析
血PMN NOD2和NALP1 mRNA 的表达水平呈显著直线负相关（n=24，r=-0.74，P<0.01）。
3 讨论
先天免疫系统是机体的第一道防线，通过模式识别受体对病原体作出快速应答。人类的模式识别受体主要有两类：一类是膜结合受体，如Toll样受体；另一类是细胞内的模式识别受体，包括NOD样受体和具有螺旋酶结构域的抗病毒蛋白受体[10]。目前的研究表明，Toll样受体与哮喘的发病机制密切相关，重度哮喘患者支气管平滑肌TLR5和TLR7的表达下降[11]，哮喘患者血調节性T淋巴细胞TLR2和TLR4的表达也下降[12]。NOD样受体家族是细胞内的模式识别受体，包含NOD2和NALP1，NOD1和NOD2是NOD样受体家族最具有代表性的亚型，NOD样受体与多种肺部急、慢性炎症性疾病有关，如肺炎、慢性阻塞性肺疾病、肺损伤、肺尘病、哮喘等[13，14]。
本研究提示，大鼠哮喘各组血PMN均有NOD2和NALP1 mRNA的表达，证实了模式识别受体可在血PMN细胞中表达，PMN可能通过表达模式识别受体在机体中起到一定的病理或生理作用。同时本研究发现，不同的模式识别受体所表达的水平不同，NOD2 mRNA的表达量显著高于对照组，而NALP1 mRNA的表达则相反，表明它们所起的作用可能也不同。通过相关分析发现，NOD2和NALP1 mRNA的表达呈显著负相关，提示不同类型的模式识别受体之间的表达具有一定的内在联系，共同参与机体的免疫过程。本文推测，在OVA诱发的哮喘模型中，由于PMN的NOD2 mRNA的表达过多及NALP1 mRNA的表达不足共同涉及了哮喘的炎症机制。国内相似的研究也发现，哮喘大鼠肺组织和哮喘患者的趋化因子CCR3阳性的粒细胞中NOD2蛋白的表达均下降[15，16]。这与本研究结果有区别，可能NOD2在不同的组织中表达不同，也可能是NOD2的蛋白与基因之间表达不一致。
目前认为，以NOD样受体为治疗靶点，选择性地抑制其表达可能有利于治疗多种急慢性疾病[17]。糖皮质激素是治疗哮喘的最有效的药物，具有抑制炎症因子释放的作用，在临床上广泛使用[18-20]。本研究结果发现，地塞米松组血PMN NOD2 mRNA的表达水平低于哮喘组，且NALP1 mRNA的表达量高于哮喘组，提示地塞米松具有下调NOD2 mRNA的表达和上调NALP1 mRNA的表达，从而起到减轻哮喘炎症的作用。
综上，哮喘大鼠血PMN NOD2 mRNA的表达升高，NALP1 mRNA的表达则相反，地塞米松具有调节模式识别受体的作用。
[参考文献]
[1] Zissler UM，Esser-von Bieren J，Jakwerth CA，et al. Current and future biomarkers in allergic asthma[J]. Allergy，2016，71（4）：475-494.
[2] Kupry■-Lipińska I，Molińska K，Kuna P. The effect of omalizumab on eosinophilic inflammation of the respiratory tract in patients with allergic asthma[J]. Pneumonol Alergol Pol，2016，84（4）：232-243.
[3] Hodge S，Hodge G，Simpson JL，et al. Blood cytotoxic/inflammatory mediators in non-eosinophilic asthma[J]. Clin Exp Allergy，2016，46（1）：60-70.
[4] Bruijnzeel PL，Uddin M，Koenderman L. Targeting neutrophilic inflammation in severe neutrophilic asthma：Can we target the disease-relevant neutrophil phenotype？[J]. J Leukoc Biol，2015，98（4）：549-556.
[5] Hosoki K，Itazawa T，Boldogh I，et al. Neutrophil recruitment by allergens contribute to allergic sensitization and allergic inflammation[J]. Curr Opin Allergy Clin Immunol，2016，16（1）：45-50.
[6] Fernández-Delgado L，Vega-Rioja A，Ventura I，et al. Allergens induce the release of lactoferrin by neutrophils from asthmatic patients[J]. PLoS One，2015，10（10）：e0141278.
[7] Minnicozzi M，Sawyer RT，Fenton MJ. Innate immunity in allergic disease[J]. Mmunol Rev，2011，242（1）：106-127. [8] Caruso R，Warner N，Inohara N，et al. NOD1 and NOD2：Signaling，host defense，and inflammatory disease[J]. Immunity，2014，41（6）：898-908.
[9] Takakubo Y，Barreto G，Konttinen YT，et al. Role of innate immune sensors，TLRs，and NALP3 in rheumatoid arthritis and osteoarthritis[J]. J Long Term Eff Med Implants，2014，24（4）：243-251.
[10] 颜文辉，蒋珍凤，童夏生，等. 14-3-3蛋白在哮喘大鼠肺组织中的表达及意义[J]. 中国基层医药，2015，22（23）：3561-3563.
[11] 叶辉，应小明，马江林，等. iNOS、TGF-β1 在哮喘大鼠中性粒细胞中的表达及其意义[J]. 温州医科大学学报，2014，44（5）：357-359.
[12] 于莉莉. 模式识别受体与自噬[J]. 新乡医学院学报，2016， 33（4）：249-253.
[13] Shikhagaie MM，Andersson CK，Mori M，et al. Mapping of TLR5 and TLR7 in central and distal human airways and identification of reduced TLR expression in severe asthma[J].Clin Exp Allergy，2014，44（2）：184-196.
[14] Pace E，Di Sano C，Ferraro M，et al. Budesonide increases TLR4 and TLR2 expression in Treg lymphocytes of allergic asthmatics[J]. Pulm Pharmacol Ther，2015，32（7）：93-100.
[15] Chaput C，Sander LE，Suttorp N，et al. NOD-Like receptors in lung diseases[J]. Front Immunol，2013，21（4）：393.
[16] Hommes TJ，Van Lieshout MH，Van’t Veer C，et al. Role of nucleotide-binding oligomerization domain-containing（NOD）2 in host defense during pneumococcal pneumonia[J]. PLoS One，2015，10（12）：e0145138.
[17] 張志刚，叶斌，童夏生，等. NOD2 和Toll 样受体1在哮喘大鼠中的表达及布地奈德对其的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学，2011，16（6）：637-642.
[18] Wong CK，Leung TF，Chu IM，et al. Aberrant expression of regulatory cytokine IL-35 and pattern recognition receptor NOD2 in patients with allergic asthma[J]. Inflammation，2015，38（1）：348-360.
[19] Jakopin ■. Nucleotide-binding oligomerization domain（NOD）inhibitors：A rational approach toward inhibition of NOD signaling pathway[J]. J Med Chem，2014，57（16）：6897-6918.
[20] 陈可彬，宋蒙蒙. 孟鲁司特联合布地奈德治疗儿童哮喘的疗效及对IL-4、TL-8、TNF-α的影响[J]. 中国现代医生，2016，54（3）：44-46.
（收稿日期：2016-07-05）
[关键词] 哮喘；模式识别受体；NOD样受体；地塞米松；发病機制
[中图分类号] R562.25 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）28-0039-03
哮喘的发病机制十分复杂，涉及多种炎症细胞和炎症因子[1]，嗜酸性粒细胞被认为是最主要的炎症细胞之一[2]。中性粒细胞（polymorphonuclear，PMN）也是众多炎症细胞中的一种，尤其在非嗜酸性粒细胞表型的哮喘、糖皮质激素治疗不敏感和重度哮喘中PMN所起的作用越来越被人们所重视[3，4]。在哮喘急性期，PMN被激活，它能分泌多种炎症因子和蛋白酶类参与哮喘的炎症机制[3，4]，但其参与哮喘炎症的机制至今尚未完全清楚。模式识别受体是一类介导天然免疫和继发性免疫的识别受体，目前认为模式识别受体与哮喘的炎症机制密切相关[5]。核苷酸结合寡聚域（nucleotide-binding oligomerization domain，NOD）2和NALP（NACHT、LRR和PYD domains-containing protein，NALP）均属于NOD样受体家族成员，为细胞内模式识别受体，参与细胞内信号传导，与机体的抗感染、肿瘤、关节炎和炎症性肠病等多种疾病的发病机制有关[6，7]。但NOD样受体家族在哮喘炎症机制中的作用如何目前知之甚少。本研究通过观察哮喘大鼠PMN NOD2和NALP1的表达，探讨哮喘的发病机制，为哮喘的防治提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 一般材料
清洁级健康雄性SD大鼠24只，4～5周龄，平均128 g，由杭州师范大学动物实验中心提供，实验动物合格证号：SCXK（浙）20140001。
1.2 主要试剂
Ⅴ级鸡卵白蛋白（ovalbumin，OVA）和Histopaque 1119及1083分离液均购自美国Sigma公司。
1.3 分组及模型制备
大鼠饲养于杭州师范大学动物实验中心，自由进食和饮水，温度20℃，湿度50%。共24只，随机平均分为三组，命名为哮喘组、对照组、地塞米松组。采用OVA致敏的方法复制哮喘模型[8]。具体方法为：第1天和第8天腹腔注射OVA/氢氧化铝混合液2 mL（含OVA 1 mg和氢氧化铝100 mg）致敏，各1次。第15天开始每天向大鼠喷雾（空气压缩雾化器：德国百瑞公司生产）1% OVA 30 min，连续激发14 d。地塞米松组在OVA雾化激发开始前一天至雾化结束止，每日1次给予腹腔注射地塞米松1 mg/只，共15 d。哮喘大鼠主要症状为搔痒、抓鼻、躁动、喘鸣、呼吸加快、腹肌抽搐、毛发逐渐变黄及无光泽等。
1.4 血PMN分离提纯和肺组织标本的制备
末次激发24 h后，水合氯醛腹腔注射麻醉，心脏抽血4 mL，采用Histopaque分离液行密度梯度离心，分离提纯血PMN[9]，0.1M PBS洗涤，台盼蓝查细胞活力，瑞氏染色查PMN纯度为90%。取左肺门组织，多聚甲醛固定、切片、HE染色，光镜下观察肺组织病理改变。
1.5 Rt-PCR法检测血PMN NOD2和NALP1 mRNA的表达
采用Trizol-离心柱法提取总RNA，然后转录成cDNA。测定RNA的反应体系（购自上海捷瑞生物工程有限公司）共20 μL，25℃干浴5 min、42℃干浴60 min、70℃干浴5 min终止反应，-80℃保存cDNA。20 μL反应液为：特异性PCR引物各0.3 μL、cDNA模板2 μL、灭菌超纯水7.4 μL、SYBR 10 μL。95℃15 min、95℃ 10 s、60℃ 20 s、72°C 20 s（39循环），增量0.5°C 10 s。基因序列见表1，结果分析采用比较CT值法：△△CT=（CTNOD2/NALP1-CTβ-actin）实验组-（CTNOD2/NALP1-CTβ-actin）对照组，基因相对表达量（RQ）采用2-△△CT方法计算。
1.6 统计学方法
采用SPSS16.0统计学软件，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，Homogeneity of Variances行方差齐性分析，多组间比较采用秩和检验，两变量相关分析采用直线相关分析法，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 肺组织病理变化
HE染色显示：哮喘组见黏液腺增生，支气管腔见较多黏液分泌物，部分管腔有黏液栓，支气管上皮细胞增生，较多炎性细胞浸润，支气管腔旁见聚集的淋巴细胞。对照组肺组织细胞清晰，结构完整，炎症细胞和支气管腔内分泌物少。地塞米松组肺组织炎症细胞和炎症分泌物较哮喘组减少（封三图1）。
2.2 血PMN NOD2和NALP1 mRNA的表达
抽提物总RNA的A260/A280比值在1.8～2.0之间，目的基因NOD2、NALP1及内参基因β-actin的溶解曲线均为单一峰，基因扩增曲线呈标准S型，溶解温度依次为90.5℃、79℃、87℃。NOD2和NALP1 mRNA的表达量均方差不齐，采用秩和检验。 哮喘组NOD2 mRNA的表达量显著高于对照组（P<0.01），地塞米松组NOD2 mRNA的表达量显著低于哮喘组（P<0.01）。哮喘组NALP1 mRNA的表达量显著低于对照组（P<0.01），地塞米松组NALP1 mRNA的表达量显著高于哮喘组（P<0.05）（表2）。
2.3 相关性分析
血PMN NOD2和NALP1 mRNA 的表达水平呈显著直线负相关（n=24，r=-0.74，P<0.01）。
3 讨论
先天免疫系统是机体的第一道防线，通过模式识别受体对病原体作出快速应答。人类的模式识别受体主要有两类：一类是膜结合受体，如Toll样受体；另一类是细胞内的模式识别受体，包括NOD样受体和具有螺旋酶结构域的抗病毒蛋白受体[10]。目前的研究表明，Toll样受体与哮喘的发病机制密切相关，重度哮喘患者支气管平滑肌TLR5和TLR7的表达下降[11]，哮喘患者血調节性T淋巴细胞TLR2和TLR4的表达也下降[12]。NOD样受体家族是细胞内的模式识别受体，包含NOD2和NALP1，NOD1和NOD2是NOD样受体家族最具有代表性的亚型，NOD样受体与多种肺部急、慢性炎症性疾病有关，如肺炎、慢性阻塞性肺疾病、肺损伤、肺尘病、哮喘等[13，14]。
本研究提示，大鼠哮喘各组血PMN均有NOD2和NALP1 mRNA的表达，证实了模式识别受体可在血PMN细胞中表达，PMN可能通过表达模式识别受体在机体中起到一定的病理或生理作用。同时本研究发现，不同的模式识别受体所表达的水平不同，NOD2 mRNA的表达量显著高于对照组，而NALP1 mRNA的表达则相反，表明它们所起的作用可能也不同。通过相关分析发现，NOD2和NALP1 mRNA的表达呈显著负相关，提示不同类型的模式识别受体之间的表达具有一定的内在联系，共同参与机体的免疫过程。本文推测，在OVA诱发的哮喘模型中，由于PMN的NOD2 mRNA的表达过多及NALP1 mRNA的表达不足共同涉及了哮喘的炎症机制。国内相似的研究也发现，哮喘大鼠肺组织和哮喘患者的趋化因子CCR3阳性的粒细胞中NOD2蛋白的表达均下降[15，16]。这与本研究结果有区别，可能NOD2在不同的组织中表达不同，也可能是NOD2的蛋白与基因之间表达不一致。
目前认为，以NOD样受体为治疗靶点，选择性地抑制其表达可能有利于治疗多种急慢性疾病[17]。糖皮质激素是治疗哮喘的最有效的药物，具有抑制炎症因子释放的作用，在临床上广泛使用[18-20]。本研究结果发现，地塞米松组血PMN NOD2 mRNA的表达水平低于哮喘组，且NALP1 mRNA的表达量高于哮喘组，提示地塞米松具有下调NOD2 mRNA的表达和上调NALP1 mRNA的表达，从而起到减轻哮喘炎症的作用。
综上，哮喘大鼠血PMN NOD2 mRNA的表达升高，NALP1 mRNA的表达则相反，地塞米松具有调节模式识别受体的作用。
[参考文献]
[1] Zissler UM，Esser-von Bieren J，Jakwerth CA，et al. Current and future biomarkers in allergic asthma[J]. Allergy，2016，71（4）：475-494.
[2] Kupry■-Lipińska I，Molińska K，Kuna P. The effect of omalizumab on eosinophilic inflammation of the respiratory tract in patients with allergic asthma[J]. Pneumonol Alergol Pol，2016，84（4）：232-243.
[3] Hodge S，Hodge G，Simpson JL，et al. Blood cytotoxic/inflammatory mediators in non-eosinophilic asthma[J]. Clin Exp Allergy，2016，46（1）：60-70.
[4] Bruijnzeel PL，Uddin M，Koenderman L. Targeting neutrophilic inflammation in severe neutrophilic asthma：Can we target the disease-relevant neutrophil phenotype？[J]. J Leukoc Biol，2015，98（4）：549-556.
[5] Hosoki K，Itazawa T，Boldogh I，et al. Neutrophil recruitment by allergens contribute to allergic sensitization and allergic inflammation[J]. Curr Opin Allergy Clin Immunol，2016，16（1）：45-50.
[6] Fernández-Delgado L，Vega-Rioja A，Ventura I，et al. Allergens induce the release of lactoferrin by neutrophils from asthmatic patients[J]. PLoS One，2015，10（10）：e0141278.
[7] Minnicozzi M，Sawyer RT，Fenton MJ. Innate immunity in allergic disease[J]. Mmunol Rev，2011，242（1）：106-127. [8] Caruso R，Warner N，Inohara N，et al. NOD1 and NOD2：Signaling，host defense，and inflammatory disease[J]. Immunity，2014，41（6）：898-908.
[9] Takakubo Y，Barreto G，Konttinen YT，et al. Role of innate immune sensors，TLRs，and NALP3 in rheumatoid arthritis and osteoarthritis[J]. J Long Term Eff Med Implants，2014，24（4）：243-251.
[10] 颜文辉，蒋珍凤，童夏生，等. 14-3-3蛋白在哮喘大鼠肺组织中的表达及意义[J]. 中国基层医药，2015，22（23）：3561-3563.
[11] 叶辉，应小明，马江林，等. iNOS、TGF-β1 在哮喘大鼠中性粒细胞中的表达及其意义[J]. 温州医科大学学报，2014，44（5）：357-359.
[12] 于莉莉. 模式识别受体与自噬[J]. 新乡医学院学报，2016， 33（4）：249-253.
[13] Shikhagaie MM，Andersson CK，Mori M，et al. Mapping of TLR5 and TLR7 in central and distal human airways and identification of reduced TLR expression in severe asthma[J].Clin Exp Allergy，2014，44（2）：184-196.
[14] Pace E，Di Sano C，Ferraro M，et al. Budesonide increases TLR4 and TLR2 expression in Treg lymphocytes of allergic asthmatics[J]. Pulm Pharmacol Ther，2015，32（7）：93-100.
[15] Chaput C，Sander LE，Suttorp N，et al. NOD-Like receptors in lung diseases[J]. Front Immunol，2013，21（4）：393.
[16] Hommes TJ，Van Lieshout MH，Van’t Veer C，et al. Role of nucleotide-binding oligomerization domain-containing（NOD）2 in host defense during pneumococcal pneumonia[J]. PLoS One，2015，10（12）：e0145138.
[17] 張志刚，叶斌，童夏生，等. NOD2 和Toll 样受体1在哮喘大鼠中的表达及布地奈德对其的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学，2011，16（6）：637-642.
[18] Wong CK，Leung TF，Chu IM，et al. Aberrant expression of regulatory cytokine IL-35 and pattern recognition receptor NOD2 in patients with allergic asthma[J]. Inflammation，2015，38（1）：348-360.
[19] Jakopin ■. Nucleotide-binding oligomerization domain（NOD）inhibitors：A rational approach toward inhibition of NOD signaling pathway[J]. J Med Chem，2014，57（16）：6897-6918.
[20] 陈可彬，宋蒙蒙. 孟鲁司特联合布地奈德治疗儿童哮喘的疗效及对IL-4、TL-8、TNF-α的影响[J]. 中国现代医生，2016，54（3）：44-46.
（收稿日期：2016-07-05）