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摘 要：国内免疫原料工程产业化及相关配套管理流程尚未完全成熟。有文献报道，项目管理的概念模式在工程项目方面可有效提高项目效率，但在生物工程研发生产用分泌型抗体细胞株建立方面还未真正涉及。本论文的创新突破是将项目管理的概念和方法融入临床体外诊断试剂和肿瘤治疗抗体的细胞株克隆筛选中，利用层次分析法，专家评定指标构建数学模型，从而科学、快速筛选得到生产用分泌型抗体工程细胞株的最佳克隆株及克隆株的最佳储存方法。其抗体主要用于临床免疫诊断试剂及肿瘤免疫靶向预防和治疗。
关键词：项目管理;细胞株克隆筛选;免疫诊断试剂;分泌型
1 细胞株建立过程项目管理的研究背景
目前，国内免疫原料工程产业化及相关配套管理流程尚未完全成熟。有文献报道，项目管理的概念模式在工程项目方面可有效提高项目效率，但在生物工程研发生产用分泌型抗体细胞株建立方面还未真正涉及，因此本论文的主要目的就是通过项目管理的知识体系，组织并协助研发团队建立一套科学、有效的关于免疫原料生产用分泌型抗体细胞株克隆筛选及保存的生产流程和管理制度，使其适用于自产临床免疫诊断试剂盒和抗体类药物的需求。
本文围绕原料工程产业化中分泌型抗体细胞株的筛选和保存展开。工程细胞株的好坏将直接影响工程的成败，对于抗体类生物研发公司和企业是核心部分。本论文的创新突破是将项目管理的概念和方法融入临床体外诊断试剂和肿瘤治疗抗体的细胞株克隆筛选中，作者完成的主要工作如下：
①负责将项目管理的概念及手段融入细胞株的建立即细胞克隆株筛选及保存过程中，利用波特五力和SWOT法分析并提出工程细胞株建立对公司战略发展的必要性，完成符合国际标准的工程细胞株的构建过程。
②协同项目管理小组对研发部门进行项目框架构建，资源调配，根据项目负责人的需求完成项目会议组织，会议记录及项目推进。
③负责组织专家评审团进行指标制定分析评分，利用层次分析法（AHP）、頭脑风暴法、工作分解（WBS）法、关键路线法、逻辑框架法等项目管理方法，实现原料项目的启动、规划、实施、监控和收尾等过程。
④负责对外项目接洽，PPT书写，公司项目介绍，组织小型培训会议。
本论文利用层次分析法，专家评定指标构建数学模型，从而科学、快速筛选得到生产用分泌型抗体工程细胞株的最佳克隆株及克隆株的最佳储存方法。其抗体主要用于临床免疫诊断试剂及肿瘤免疫靶向预防和治疗。为了顺利推进计划并控制项目总生产成本，完成绩效考核，时间可控等目的。项目小组与各部门沟通后，参考并依据国家级指标，利用WBS方法将工作内容逐步分解，同时设定项目考核指标及绩效指标，以解决生物企业在研发类项目中无法控制时间，无法核算计量总成本和无法进行绩效考核的问题。最重要的是利用项目管理的手段实现了分泌型抗体细胞克隆株科学筛选和存储问题。同时，本文运用项目管理的知识体系，从而建立和完善相应的管理制度，帮助项目达到高效，控成本，易管理的目的。
运用波特五力模型对细胞克隆筛选进行相应的策略分析。波特五力模型分析理论，是由迈克尔·波特（Michael Porter）于80年代初提出的，存在着五种基本的竞争力量：潜在的行业新进入者、替代品的竞争、买方讨价还价的能力、供应商讨价还价的能力以及行业内竞争者现在的竞争能力从对外部环境的分析中，制定企业项目的战略方案。如果用于竞争战略的分析，可以有效地分析客户的竞争环境。同时，又运用了SWOT分析方法，对项目进行了强势与弱势比较，机会与威胁比较。从而在细胞克隆筛选方面制定出符合具有竞争性项目的方案。首先，我们组建项目预评估小组，通过预模型模拟时间，生产材料和人员劳动力资源合理配置，以满足抗体大规模生产的时间与资源成本控制的配比关系。作为项目实施过程中的路径绩效指标的设定。同时，通过预实验项目小组完成项目效率，成本资源，绩效指标三者之间合理配置，进行各部门间的深度沟通，制定和完善细胞株筛选管理制度，质量检测管理制度，项目跟踪管理制度和项目的综合管理即人力资源方面的员工绩效评定，员工技能培训，协助各部门高效，可控的运转。最主要的是通过专家评定的方式得到细胞株筛选及保存评价指标从而通过项目管理中科学手段即层次分析（AHP）数学模型来完成细胞克隆株的筛选及保存模式（见图1）。
<E：＼书＼排版＼中小企业管理与科技·上旬刊201601＼文件＼108-1.jpg>
图1 细胞克隆筛选研究方法及技术路线
1.1 分泌抗体细胞制备
分泌抗体细胞的亲本细胞和免疫亲代细胞采用适宜的方法进行融合、筛选及克隆化。
1.2 细胞克隆株检定
从免疫蛋白类及亚类、亲和力、特异性、交叉反应和效价测定五个方面对单克隆抗体进行检定并规范检定流程。
1.3 细胞克隆株筛选和保存（本部分融入项目管理概念和方法）
对分泌型抗体细胞生产用细胞株克隆筛选的专业评价和数学模型的建立。从5个方面对研究进行细化，第一，细胞克隆筛选项目策略分析;第二，细胞克隆筛选质量检测管理;第三，细胞克隆筛选数学模型建立;第四，细胞克隆储存数学模型建立;第五，项目的综合管理。
1.4 抗体生产及纯化
抗体生产细胞培养法，可采用反应器生产或细胞培养瓶生产制备单克隆抗体。应验证所用的纯化方法能去除可能存在的非目标产物污染等。建立相应的管理制度。
建立质量检测方法：包括原液（细胞培养上清液、纯化抗体）物理化学检测外观、pH值、蛋白含量的测定、纯度测定及生物学活性检定。质量检定是细胞克隆株筛选的必备条件。
2 细胞克隆株筛选的层次分析数学模型
本论文主要想解决的问题是国内体外诊断试剂免疫原料的供应基本依靠进口，我国自己的企业尚缺乏这方面的自主研发试剂。文中提到的细胞株筛选即指用于临床诊断试剂原料生产用的杂交瘤细胞株，其生产用细胞株的筛选及保存存在很多的问题。第一，没有规范的细胞株筛选指标和流程，细胞本身活率低，活细胞倍增时间长，抗体分泌量不高，成品抗体生物学活性不稳定。在细胞保存方面，储存混乱没有相应的出入库登记制度。细胞株也没有明确的冻信息，比如冻存人、冻存液配方、冻存细胞密度、冻存体积，以及细胞株的代次等信息。 究其公司存在的问题进行分析，公司主要从事抗体药物免疫治疗方面的研发及细胞放大培养研究。因此，对于杂交瘤细胞株的筛选和保存方面没有太多可借鉴的成型资料。没有规范化的细胞库储存制度将会给公司造成巨大的经济损失。
面对如此混乱的局面，我们希望能运用项目管理的知识帮助公司建立细胞株筛选指标以及相关流程，细胞株通过筛选如何获得高质量的细胞株以及建立相关的保存机制是目前项目的首要目标。运用项目管理的层次分析法（AHP）计算可以制定筛选指标以及各指标的权重关系。通过权重关系可以得到指标的优先级。从而更好的服务于项目本身，节省成本时间。公司专家从5个方面P1-P5，细胞倍增时间，产量，最高活细胞密度，活率，生物学活性对细胞株筛选进行第一层次评估，得到A矩阵，进行纵项归一和横项归一后计算得到权重值ω，经一步计算矩阵特征根，进行一致性判断证明矩阵符合一致性要求（CR<0.1）。5项指标是由专家们根据细胞株生产，纯化，质量检定等方面综合考虑后确定的。
目标：筛选合适的细胞克隆株。（表1）
表1
[A＼&P1＼&P2＼&P3＼&P4＼&P5＼&
细胞倍增时间
产 量
最高活细胞密度
活 率
生物学活性＼&细胞倍增时间
1
1
1
1/4
2＼&产量
1
1
1/2
1/4
2＼&最高活细胞密度
1
2
1
1/2
2＼&活率
4
4
2
1
5＼&生物学活性
1/2
1/2
1/2
1/5
1＼&]
以上數据为第一层次细胞株筛选AHP数学模型分析完成。根据数据计算结果，我们将不同细胞克隆株从细胞倍增时间（T1/2），产量，最高活细胞密度，活率，生物学活性五个方面进行第二层次筛选，并完成一致性检验。
通过专家对细胞株的分析我们得到第一层次5项筛选指标即细胞活率，最高活细胞密度，细胞倍增时间，细胞产量以及生物学活性。第二层次7个矩阵的评分结果进行计算并通过了一致性检验，最终依据综合权重系数得到细胞株1为0.35，细胞株2为0.43，细胞株3为0.22;细胞株2〉细胞株1〉细胞株3，因此，运用层次数学模型计算筛选后得出细胞株2为最佳选择细胞株。
3 筛选后细胞克隆株储存层次分析
高品质的细胞株被选定后，下一步的目标分析细胞株的保存方法。保存方法的不合理也会对日后细胞株的使用造成不可挽回的损失。
目标：细胞株保存条件筛选。（表2）
表2
[矩阵： A＼&活细胞倍
增时间＼&活率＼&产量＼&生物学
活性＼&最高活细
胞密度＼&细胞回收率＼&活细胞倍
增时间
活 率
产 量
生物学活性
最高活细
胞密度
细胞回收率＼&1
1/2
5
7
1/2
1＼&2
1
6
9
5
2＼&1/5
1/6
1
2
1/3
1/3＼&1/7
1/9
1/2
1
1/5
1/5＼&2
1/5
3
5
1
1＼&1
1/2
3
5
1
1＼&]
细胞株经筛选后，通过专家针对细胞株保存方法的分析，第一层次得出6项评价指标分别是活细胞倍增时间，细胞活率，最高活细胞密度，细胞产量，分泌抗体的生物学活性以及细胞冻存后的回收率。第二层次3项指标分别是冻存液，冻存方法，冻存时间。利用项目学的AHP层次分析法进行计算得到权重系数，将第一层次权重系数与第二层次权重系数计算比较两层的综合权重，将综合权重系数从大到小依次排序，最大的数值就是我们需要的细胞株保存方法。
综上所述，从细胞株克隆筛选和细胞株保存两方面对细胞株的建立进行分析，利用AHP层次分析手段，共13个矩阵，12个指标。我们可以看出不同品质的细胞克隆株混杂在一起，用极限稀释法进行筛选后得到3株细胞再通过5指标的AHP分析方式，最终计算得到细胞株2为符合综合筛选指标的细胞株。细胞株保存方面细胞经9指标评定计算，可见冻存液，冻存方法及冻存时间相比较，细胞保存的关键指标是冻存液，因此冻存液的品质对细胞株筛选的建立具有决定性的意义。
将两方面的指标科学的综合评价后最终得到细胞株2及高质量冻存液为最佳配合方式。抗体药物的预防与肿瘤靶向治疗作用，近年来也成为免疫药物研究热点，本文广义上是细胞株建立在项目管理中的研究与实施，将其细化是指分泌抗体型的细胞都可进行借鉴，不仅是临床用免疫诊断试剂的原料生产，而且可以升级为免疫药物的靶向治疗。两者使用的细胞都是抗体分泌型的细胞，产生的抗体可以用于免疫诊断试剂盒快速准确地鉴定肿瘤病人分型，同时，抗体药物的靶向治疗也可解决放疗和化疗病人的癌症细胞和正常细胞广谱杀伤问题。
参考文献：
[1]刘琪.诊断用酶的基因重组技术[J].国外医学临床生物化学与检验学分册， 1995，16（5）：230.
[2]Chen JY et al. J Med Virol， 1989，27：269.
[3]朱萍.医院管理论坛，2008，2（25）：48.
[4]谷威，潘峰，周飞.体外诊断试剂行业发展概述[J].中国药物评价，2012，29（1）：98.
[5]刘毅.我国IVD产业标准的现状与发展[J].中国医疗器械信息，2012：4.
作者简介：郭菲（1977-），女，江苏无锡人，汉，医学经理，助理研究员，生物医学项目管理。
关键词：项目管理;细胞株克隆筛选;免疫诊断试剂;分泌型
1 细胞株建立过程项目管理的研究背景
目前，国内免疫原料工程产业化及相关配套管理流程尚未完全成熟。有文献报道，项目管理的概念模式在工程项目方面可有效提高项目效率，但在生物工程研发生产用分泌型抗体细胞株建立方面还未真正涉及，因此本论文的主要目的就是通过项目管理的知识体系，组织并协助研发团队建立一套科学、有效的关于免疫原料生产用分泌型抗体细胞株克隆筛选及保存的生产流程和管理制度，使其适用于自产临床免疫诊断试剂盒和抗体类药物的需求。
本文围绕原料工程产业化中分泌型抗体细胞株的筛选和保存展开。工程细胞株的好坏将直接影响工程的成败，对于抗体类生物研发公司和企业是核心部分。本论文的创新突破是将项目管理的概念和方法融入临床体外诊断试剂和肿瘤治疗抗体的细胞株克隆筛选中，作者完成的主要工作如下：
①负责将项目管理的概念及手段融入细胞株的建立即细胞克隆株筛选及保存过程中，利用波特五力和SWOT法分析并提出工程细胞株建立对公司战略发展的必要性，完成符合国际标准的工程细胞株的构建过程。
②协同项目管理小组对研发部门进行项目框架构建，资源调配，根据项目负责人的需求完成项目会议组织，会议记录及项目推进。
③负责组织专家评审团进行指标制定分析评分，利用层次分析法（AHP）、頭脑风暴法、工作分解（WBS）法、关键路线法、逻辑框架法等项目管理方法，实现原料项目的启动、规划、实施、监控和收尾等过程。
④负责对外项目接洽，PPT书写，公司项目介绍，组织小型培训会议。
本论文利用层次分析法，专家评定指标构建数学模型，从而科学、快速筛选得到生产用分泌型抗体工程细胞株的最佳克隆株及克隆株的最佳储存方法。其抗体主要用于临床免疫诊断试剂及肿瘤免疫靶向预防和治疗。为了顺利推进计划并控制项目总生产成本，完成绩效考核，时间可控等目的。项目小组与各部门沟通后，参考并依据国家级指标，利用WBS方法将工作内容逐步分解，同时设定项目考核指标及绩效指标，以解决生物企业在研发类项目中无法控制时间，无法核算计量总成本和无法进行绩效考核的问题。最重要的是利用项目管理的手段实现了分泌型抗体细胞克隆株科学筛选和存储问题。同时，本文运用项目管理的知识体系，从而建立和完善相应的管理制度，帮助项目达到高效，控成本，易管理的目的。
运用波特五力模型对细胞克隆筛选进行相应的策略分析。波特五力模型分析理论，是由迈克尔·波特（Michael Porter）于80年代初提出的，存在着五种基本的竞争力量：潜在的行业新进入者、替代品的竞争、买方讨价还价的能力、供应商讨价还价的能力以及行业内竞争者现在的竞争能力从对外部环境的分析中，制定企业项目的战略方案。如果用于竞争战略的分析，可以有效地分析客户的竞争环境。同时，又运用了SWOT分析方法，对项目进行了强势与弱势比较，机会与威胁比较。从而在细胞克隆筛选方面制定出符合具有竞争性项目的方案。首先，我们组建项目预评估小组，通过预模型模拟时间，生产材料和人员劳动力资源合理配置，以满足抗体大规模生产的时间与资源成本控制的配比关系。作为项目实施过程中的路径绩效指标的设定。同时，通过预实验项目小组完成项目效率，成本资源，绩效指标三者之间合理配置，进行各部门间的深度沟通，制定和完善细胞株筛选管理制度，质量检测管理制度，项目跟踪管理制度和项目的综合管理即人力资源方面的员工绩效评定，员工技能培训，协助各部门高效，可控的运转。最主要的是通过专家评定的方式得到细胞株筛选及保存评价指标从而通过项目管理中科学手段即层次分析（AHP）数学模型来完成细胞克隆株的筛选及保存模式（见图1）。
<E：＼书＼排版＼中小企业管理与科技·上旬刊201601＼文件＼108-1.jpg>
图1 细胞克隆筛选研究方法及技术路线
1.1 分泌抗体细胞制备
分泌抗体细胞的亲本细胞和免疫亲代细胞采用适宜的方法进行融合、筛选及克隆化。
1.2 细胞克隆株检定
从免疫蛋白类及亚类、亲和力、特异性、交叉反应和效价测定五个方面对单克隆抗体进行检定并规范检定流程。
1.3 细胞克隆株筛选和保存（本部分融入项目管理概念和方法）
对分泌型抗体细胞生产用细胞株克隆筛选的专业评价和数学模型的建立。从5个方面对研究进行细化，第一，细胞克隆筛选项目策略分析;第二，细胞克隆筛选质量检测管理;第三，细胞克隆筛选数学模型建立;第四，细胞克隆储存数学模型建立;第五，项目的综合管理。
1.4 抗体生产及纯化
抗体生产细胞培养法，可采用反应器生产或细胞培养瓶生产制备单克隆抗体。应验证所用的纯化方法能去除可能存在的非目标产物污染等。建立相应的管理制度。
建立质量检测方法：包括原液（细胞培养上清液、纯化抗体）物理化学检测外观、pH值、蛋白含量的测定、纯度测定及生物学活性检定。质量检定是细胞克隆株筛选的必备条件。
2 细胞克隆株筛选的层次分析数学模型
本论文主要想解决的问题是国内体外诊断试剂免疫原料的供应基本依靠进口，我国自己的企业尚缺乏这方面的自主研发试剂。文中提到的细胞株筛选即指用于临床诊断试剂原料生产用的杂交瘤细胞株，其生产用细胞株的筛选及保存存在很多的问题。第一，没有规范的细胞株筛选指标和流程，细胞本身活率低，活细胞倍增时间长，抗体分泌量不高，成品抗体生物学活性不稳定。在细胞保存方面，储存混乱没有相应的出入库登记制度。细胞株也没有明确的冻信息，比如冻存人、冻存液配方、冻存细胞密度、冻存体积，以及细胞株的代次等信息。 究其公司存在的问题进行分析，公司主要从事抗体药物免疫治疗方面的研发及细胞放大培养研究。因此，对于杂交瘤细胞株的筛选和保存方面没有太多可借鉴的成型资料。没有规范化的细胞库储存制度将会给公司造成巨大的经济损失。
面对如此混乱的局面，我们希望能运用项目管理的知识帮助公司建立细胞株筛选指标以及相关流程，细胞株通过筛选如何获得高质量的细胞株以及建立相关的保存机制是目前项目的首要目标。运用项目管理的层次分析法（AHP）计算可以制定筛选指标以及各指标的权重关系。通过权重关系可以得到指标的优先级。从而更好的服务于项目本身，节省成本时间。公司专家从5个方面P1-P5，细胞倍增时间，产量，最高活细胞密度，活率，生物学活性对细胞株筛选进行第一层次评估，得到A矩阵，进行纵项归一和横项归一后计算得到权重值ω，经一步计算矩阵特征根，进行一致性判断证明矩阵符合一致性要求（CR<0.1）。5项指标是由专家们根据细胞株生产，纯化，质量检定等方面综合考虑后确定的。
目标：筛选合适的细胞克隆株。（表1）
表1
[A＼&P1＼&P2＼&P3＼&P4＼&P5＼&
细胞倍增时间
产 量
最高活细胞密度
活 率
生物学活性＼&细胞倍增时间
1
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2＼&产量
1
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2＼&最高活细胞密度
1
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2＼&活率
4
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5＼&生物学活性
1/2
1/2
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以上數据为第一层次细胞株筛选AHP数学模型分析完成。根据数据计算结果，我们将不同细胞克隆株从细胞倍增时间（T1/2），产量，最高活细胞密度，活率，生物学活性五个方面进行第二层次筛选，并完成一致性检验。
通过专家对细胞株的分析我们得到第一层次5项筛选指标即细胞活率，最高活细胞密度，细胞倍增时间，细胞产量以及生物学活性。第二层次7个矩阵的评分结果进行计算并通过了一致性检验，最终依据综合权重系数得到细胞株1为0.35，细胞株2为0.43，细胞株3为0.22;细胞株2〉细胞株1〉细胞株3，因此，运用层次数学模型计算筛选后得出细胞株2为最佳选择细胞株。
3 筛选后细胞克隆株储存层次分析
高品质的细胞株被选定后，下一步的目标分析细胞株的保存方法。保存方法的不合理也会对日后细胞株的使用造成不可挽回的损失。
目标：细胞株保存条件筛选。（表2）
表2
[矩阵： A＼&活细胞倍
增时间＼&活率＼&产量＼&生物学
活性＼&最高活细
胞密度＼&细胞回收率＼&活细胞倍
增时间
活 率
产 量
生物学活性
最高活细
胞密度
细胞回收率＼&1
1/2
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细胞株经筛选后，通过专家针对细胞株保存方法的分析，第一层次得出6项评价指标分别是活细胞倍增时间，细胞活率，最高活细胞密度，细胞产量，分泌抗体的生物学活性以及细胞冻存后的回收率。第二层次3项指标分别是冻存液，冻存方法，冻存时间。利用项目学的AHP层次分析法进行计算得到权重系数，将第一层次权重系数与第二层次权重系数计算比较两层的综合权重，将综合权重系数从大到小依次排序，最大的数值就是我们需要的细胞株保存方法。
综上所述，从细胞株克隆筛选和细胞株保存两方面对细胞株的建立进行分析，利用AHP层次分析手段，共13个矩阵，12个指标。我们可以看出不同品质的细胞克隆株混杂在一起，用极限稀释法进行筛选后得到3株细胞再通过5指标的AHP分析方式，最终计算得到细胞株2为符合综合筛选指标的细胞株。细胞株保存方面细胞经9指标评定计算，可见冻存液，冻存方法及冻存时间相比较，细胞保存的关键指标是冻存液，因此冻存液的品质对细胞株筛选的建立具有决定性的意义。
将两方面的指标科学的综合评价后最终得到细胞株2及高质量冻存液为最佳配合方式。抗体药物的预防与肿瘤靶向治疗作用，近年来也成为免疫药物研究热点，本文广义上是细胞株建立在项目管理中的研究与实施，将其细化是指分泌抗体型的细胞都可进行借鉴，不仅是临床用免疫诊断试剂的原料生产，而且可以升级为免疫药物的靶向治疗。两者使用的细胞都是抗体分泌型的细胞，产生的抗体可以用于免疫诊断试剂盒快速准确地鉴定肿瘤病人分型，同时，抗体药物的靶向治疗也可解决放疗和化疗病人的癌症细胞和正常细胞广谱杀伤问题。
参考文献：
[1]刘琪.诊断用酶的基因重组技术[J].国外医学临床生物化学与检验学分册， 1995，16（5）：230.
[2]Chen JY et al. J Med Virol， 1989，27：269.
[3]朱萍.医院管理论坛，2008，2（25）：48.
[4]谷威，潘峰，周飞.体外诊断试剂行业发展概述[J].中国药物评价，2012，29（1）：98.
[5]刘毅.我国IVD产业标准的现状与发展[J].中国医疗器械信息，2012：4.
作者简介：郭菲（1977-），女，江苏无锡人，汉，医学经理，助理研究员，生物医学项目管理。