观察重组人神经调节蛋白（recombinant neuregulin-1beta，rhNRG）-1β在氧和葡萄糖剥夺（oxygen-glucose deprivation，OGD）条件下通过细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路对小鼠神经干细胞增殖能力的影响。

将怀孕14~ 17 d的小鼠处死，分离脑室管膜下区的脑组织，提取神经干细胞。采用体外细胞培养方法进行细胞传代和鉴定。神经干细胞鉴定采用SABC-FITC (POD）双标试剂盒，标记免疫荧光细胞化学法镜下检测巢蛋白（Nestin）表达。空白对照组：取鉴定后的神经干细胞，细胞数为2 × 10⁷个，放入24孔培养板中，DMEM/F12完全培养液培养3 h; OGD组：取鉴定后神经干细胞，细胞数为2 × 10⁷个，放入24孔培养板中，加入不含葡萄糖的DMEM/F12培养液，将培养板移入潮湿密闭容器内（37 ℃恒温培养），容器内含有氮气（950 ml/L）和氧气（50 ml/L）的混合气体，缺糖缺氧培养1 h后，再更换完全培养液培养3 h；OGD + rhNRG-1β组：在OGD干预前先加入100 μg/L rhNRG-1β，再培养3 h。神经球形成：分别取3组干细胞，反复吹打成单细胞，按细胞个数1 × 10⁶/ml将神经干细胞接种到含多聚赖氨酸盖玻片上的培养板中，培养7 d后取出盖玻片，相差镜下观察3组干细胞神经球形成，计算神经干细胞增殖变化；克隆形成：分别取3组干细胞，接种于60 mm培养皿中，细胞个数2 × 10⁷个，完全培养液培养24 h，相差镜下观察3组细胞克隆形成，计算神经干细胞增殖变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）：测定3组干细胞磷酸化ERK (pERK）蛋白的变化，观察rhNRG-1β通过ERK信号通路上调pERK蛋白表达对小鼠神经干细胞增殖能力的影响。

镜下原代培养的神经干细胞呈单个或成对生长，形态呈圆形；神经干细胞增殖呈团状集落；可见带有黄绿色荧光的特异性Nestin蛋白标记的神经干细胞。神经干细胞神经球数量、平均直径组间比较差异有统计学意义（F= 693.66、1 002.09，P均< 0.01），其中OGD组神经干细胞神经球形成受到显著抑制，形成数量、平均直径[（88.78 ± 7.14）个、（62.12 ± 2.52）μm]明显低于对照组[（246.34 ± 8.67）个、 （128.45 ± 2.33）μm]和OGD + rh-NRG-1β组[（237.87 ± 6.61）个、 （118.37 ± 2.71） μm，P均< 0.01]。神经干细胞克隆形成率组间比较差异有统计学意义（F= 132.03，P < 0.01），其中OGD组神经干细胞克隆形成受到显著抑制，形成率[（11.65 ± 0.94）%]明显低于对照组[ （33.23 ± 2.93）%]和OGD + rh-NRG-1β组[（31.42 ± 2.61）%，P均< 0.01 ]。Western blot显示，神经干细胞pERK蛋白表达组间比较差异有统计学意义（F= 63.76，P < 0.01），其中OGD组pERK蛋白的相对表达量（0.487 ± 0.072）明显低于对照组（1.013 ± 0.112）和OGD + rh-NRG-1β组（1.752 ± 0.278 ，P均< 0.01）。

在OGD条件下，pERK蛋白表达下降，小鼠神经干细胞增殖受到抑制；rhNRG-1β能上调pERK蛋白表达，促进小鼠神经干细胞的增殖。小鼠神经干细胞的增殖能力受ERK信号通路的影响。