【摘 要】
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基于他克莫司的生物合成途径和机制,根据生物合成基因簇序列设计引物,通过PCR扩增天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)乙酰CoA羧化酶和游动放线菌(Actinoplanes sp.)N902-
【机 构】
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中国医药工业研究总院上海医药工业研究院,创新药物与制药工艺国家重点实验室,上海201203
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基于他克莫司的生物合成途径和机制,根据生物合成基因簇序列设计引物,通过PCR扩增天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)乙酰CoA羧化酶和游动放线菌(Actinoplanes sp.)N902-109赖氨酸环化脱氨酶/非核糖体肽合成酶(rapL/rapP)基因,将其整合到筑波链霉菌(Streptomyces tsukubaensis No.9993基因组上,成功构建了分别过表达乙酰CoA羧化酶基因和rapL/rapP基因的重组工程菌,分别命名为SIPI-F002和SIPI-F003.试验结果显示,添加0.1％丙酸钠和0.01％油酸甲酯均可以促进工程菌SIPI-F002合成他克莫司,相应摇瓶产量为392和383 μg/ml.调整发酵培养基复合碳源为4％糊精和2％可溶性淀粉,可以促进SIPI-F003发酵生产他克莫司,摇瓶产量达到694 μg/ml.
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