目的 研究四环素调控表达的肿瘤坏死因子α (TNFα)抑制HBV复制的作用. 方法 以pcDNA4TM/四环素操纵子序列(TO)载体为模板,用PCR法扩增含四环素调控表达序列片段TO,插入pUC118载体中测序,选择测序正确的序列取代pVITRO3载体中相应的片段,构建成pVITRO3-TO.用相同的方法以pcDNA6/四环素阻遏蛋白(TR)(C)载体为模板扩增TR基因,经测序证实后插入pVITRO3-TO载体的一个多克隆位点,构建成pVITRO3-TO-TR.在另一个多克隆位点插入TNF α 基因,构建pVITRO3-TO-TR-TNF α .将重组质粒瞬时转染HepG2细胞,研究四环素调控表达TNF α 的有效性.以HepG2.2.15细胞为HBV复制模型,转染pVITRO3-TO-TR-TNF α 后,经潮霉素抗性筛选及有限稀释,选择高效表达TNF α 的细胞建立细胞系,观察经四环素调控表达后,TNF α 抑制HBV复制的作用.多组间数据比较使用方差分析. 结果 经过改建的双表达载体能够有效表达TNF α,并可以用不同剂量的四环素进行调控,四环素的最佳工作浓度为1.0μ g/ml.诱导1、3、5d后,转染pVITRO3-TOTR-TNF α 组上清液中的HBsAg抑制率分别为14.8％、11.5％、28.44％,转染pVITRO3-TOTR组分别为1.2％、1.1％、0,诱导5d后的HBsAg抑制率差异有统计学意义(F=13.65,P＜0.05);转染pVITRO3-TOTR-TNF α 组的HBeAg的抑制率分别为50％、26.67％、47.85％,转染pVITRO3-TOTR组分别为0.3％、1.3％、0,诱导1、3、5d时的HBeAg抑制率差异均有统计学意义(F值分别为27.31、14.06和43.76,P值均＜0.05).荧光定量PCR结果显示,诱导5d后,TNF α 对细胞内和培养上清液的HBV DNA有明显的抑制作用,抑制率分别为70.26％和79.86％,与对照组相比,差异均有统计学意义(F值分别为96.7和62.72,P＜0.05).进一步的研究结果表明,TNF α对HBV S基因的mRNA转录有明显抑制作用.结论 成功构建了四环素调控表达的TNF α 载体,瞬时和稳定转染细胞后均能有效表达.在细胞模型中对HBV DNA的抑制作用最好,其次是对HBeAg的抑制,对HBsAg的抑制作用最弱.TNF α对病毒转录水平的抑制可能是其发挥抗HBV作用的一个重要环节。