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摘 要：目的 建立舒肝丸中芍药苷含量测定方法。方法 采用C18柱，以甲醇：水（25：75）为流动相，检测波长为243nm。结果 线性范围为0.20～1.00ug，本法回收率为99.88%，RSD为1.41%。结论 本法操作简便易行，可供舒肝丸中芍药苷质量控制用。
关键词：舒肝丸 芍药苷 高效液相色谱法
Determination of Paeoniflorin in Shu-gan Pill by HPLC
Li Zhiqian Sun Dapeng
（Harbin Pharmaceutical Group institute，Harbin 150056，China）
[Abstract] Objective： To establish the determination method of paeoniflorin in Shu-gan Pill. Methods： The C18 column was used，the mobile phase was methanol-water（25：75），the detection wave- length was at 243 nm. Results： The linear range of paeoniflorin was 0.20-1.00μg. The average recovery of paeoniflorin was 99.88% with RSD 1.41%. Conclusion： The method is simple and convenience and can be used for paeoniflorin quality control in Shu-gan Pill.
[Keywords] Shu-gan Pill； paeoniflorin； HPLC
舒肝丸由白芍、川楝子、延胡索、沉香等数味中药制成，具有舒肝和胃，理气止痛的功效，用于肝郁气滞，胸胁胀满，胃脘疼痛，嘈杂呕吐，嗳气泛酸。方中白芍[1]具有养血敛阴、柔肝止痛功效，文献报道白芍中芍药苷[2]具有抗炎镇痛之功，为方中主要有效成分之一，为了更好地控制产品的内在质量，保证临床用药的安全有效，本文采用高效液相色谱法测定制剂中芍药苷的含量[3～5]，并进行了方法学考察，作为舒肝丸质量控制的一个方面进行研究。
1仪器与试药
仪器：HP-1100高效液相色谱仪，WDL-95色谱工作站；KQ-250型超声波仪；试药：舒肝丸（哈药集团制药六厂提供）；甲醇为色谱纯，水为双蒸水；芍药苷对照品：中国药品生物制品检定所提供。
2实验方法
2.1色谱条件 色谱柱：Hypersil？誖BDS C18（4.6mm×150mm）柱，流动相： 甲醇-水（25：75），柱温为室温，检测波长：243nm；流速：1.0ml/min，进样量：10ul。
2.2線性范围 精密称取芍药苷对照品10mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；1，2，3，4，5ml分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，绘制标准曲线，表明芍药苷在0.20～1.00μg范围内呈良好线性关系，其回归方程为：A=53.190+68083.129c（r=0.9999）。
2.3精密度试验 精密量取对照品溶液2ul，重复进样五次，分别测得峰面积，RSD为1.32%（n=5）。
2.4稳定性试验 取同一份供试品溶液分别于1h，2h，12h，24h，36h进样10ul，测得峰面积，RSD为2.93%（n=5），其在36小时内基本稳定。
2.5重复性试验 取同一批样品5份，各2g，精密称定，并按样品测定方法测定，RSD为2.24%（n=5）。
2.6回收率实验 精密称取已知含量的同一批样品0.1g，分别精密加入芍药苷对照品溶液0.24mg，按样品测定方法测定，平均回收率为99.88%，RSD为1.41%（n=5）。结果见表1。
表1 回收率测定结果
3测定方法与结果
3.1测定方法 取舒肝丸粉末2g，精密称定，置50 m1锥形瓶中，加50%乙醇25m1，密塞，摇匀，称定重量，超声溶解，取出，放冷，称重，用50%乙醇溶液补足损失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取芍药苷对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，色谱图（见图1（A），图1（B））。
（A）对照品溶液 （B）供试品溶液 （C）空白样品溶液
图1 舒肝丸中芍药苷测定HPLC色谱图
3.2干扰性试验 按处方比例，配制不含白芍的空白样品溶液，按测定方法测定，在与芍药苷对照品相同保留时间处未显示明显色谱峰，认为无干扰，见图1（C）。
3.3样品测定结果 对三批样品进行含量测定，测定方法见前，结果见表2。
表2 样品含量测定结果（n=3）
4讨论
4.1检测波长的选择 取对照品溶液，在200～400nm波长范围内进行扫描，结果显示芍药苷在243nm波长处有一特征吸收峰，这与文献报道一致，在此波长下阴性样品无干扰，因此，以此波长作为测定波长。
4.2提取溶剂的确定 根据文献及芍药苷的性质可知，芍药苷在水、不同浓度乙醇、甲醇中均有较好的溶解性能，取本品适量，精密加入100倍溶剂，超声提取测定，实验结果表明水及50%乙醇的提取量相近，但水提时含杂质成分较多，故采用50%乙醇为提取溶剂。
4.3提取时间的确定 根据文献综合考虑，选择超声为提取方法，对其超声时间进行考察，实验结果表明超声时间最好在15分钟以内，否则，超声时间长会对芍药苷有破坏作用，从而降低了其含量。
4.4试验结果表明 本方法简便、准确、可靠。可以用于本品的质量控制。■
参考文献
[1] 中华人民共和国国家药典委员会. 中华人民共和国药典[S]2000年版.北京：化学工业出版社，2000：一部78.
[2] 徐国钧主编.生药学[M]第二版.北京：人民卫生出版社，1997，111.
[3] 马涵涛，谢秀娟，张翠英.HPLC测定妇科消炎颗粒中芍药苷的含量[J].中华实用中西医杂志， 2003；16（5）：635.
[4] 葛萍，雷岁合，曹新宪.HPLC法测定益智壮骨冲剂中芍药甙的含量[J].中成药，1996，18（2）：13.
[5] 林伟忠.白芍及其复方制剂中芍药甙测定方法研究[J].中成药，1997；19（6）：43
关键词：舒肝丸 芍药苷 高效液相色谱法
Determination of Paeoniflorin in Shu-gan Pill by HPLC
Li Zhiqian Sun Dapeng
（Harbin Pharmaceutical Group institute，Harbin 150056，China）
[Abstract] Objective： To establish the determination method of paeoniflorin in Shu-gan Pill. Methods： The C18 column was used，the mobile phase was methanol-water（25：75），the detection wave- length was at 243 nm. Results： The linear range of paeoniflorin was 0.20-1.00μg. The average recovery of paeoniflorin was 99.88% with RSD 1.41%. Conclusion： The method is simple and convenience and can be used for paeoniflorin quality control in Shu-gan Pill.
[Keywords] Shu-gan Pill； paeoniflorin； HPLC
舒肝丸由白芍、川楝子、延胡索、沉香等数味中药制成，具有舒肝和胃，理气止痛的功效，用于肝郁气滞，胸胁胀满，胃脘疼痛，嘈杂呕吐，嗳气泛酸。方中白芍[1]具有养血敛阴、柔肝止痛功效，文献报道白芍中芍药苷[2]具有抗炎镇痛之功，为方中主要有效成分之一，为了更好地控制产品的内在质量，保证临床用药的安全有效，本文采用高效液相色谱法测定制剂中芍药苷的含量[3～5]，并进行了方法学考察，作为舒肝丸质量控制的一个方面进行研究。
1仪器与试药
仪器：HP-1100高效液相色谱仪，WDL-95色谱工作站；KQ-250型超声波仪；试药：舒肝丸（哈药集团制药六厂提供）；甲醇为色谱纯，水为双蒸水；芍药苷对照品：中国药品生物制品检定所提供。
2实验方法
2.1色谱条件 色谱柱：Hypersil？誖BDS C18（4.6mm×150mm）柱，流动相： 甲醇-水（25：75），柱温为室温，检测波长：243nm；流速：1.0ml/min，进样量：10ul。
2.2線性范围 精密称取芍药苷对照品10mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；1，2，3，4，5ml分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，绘制标准曲线，表明芍药苷在0.20～1.00μg范围内呈良好线性关系，其回归方程为：A=53.190+68083.129c（r=0.9999）。
2.3精密度试验 精密量取对照品溶液2ul，重复进样五次，分别测得峰面积，RSD为1.32%（n=5）。
2.4稳定性试验 取同一份供试品溶液分别于1h，2h，12h，24h，36h进样10ul，测得峰面积，RSD为2.93%（n=5），其在36小时内基本稳定。
2.5重复性试验 取同一批样品5份，各2g，精密称定，并按样品测定方法测定，RSD为2.24%（n=5）。
2.6回收率实验 精密称取已知含量的同一批样品0.1g，分别精密加入芍药苷对照品溶液0.24mg，按样品测定方法测定，平均回收率为99.88%，RSD为1.41%（n=5）。结果见表1。
表1 回收率测定结果
3测定方法与结果
3.1测定方法 取舒肝丸粉末2g，精密称定，置50 m1锥形瓶中，加50%乙醇25m1，密塞，摇匀，称定重量，超声溶解，取出，放冷，称重，用50%乙醇溶液补足损失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取芍药苷对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，色谱图（见图1（A），图1（B））。
（A）对照品溶液 （B）供试品溶液 （C）空白样品溶液
图1 舒肝丸中芍药苷测定HPLC色谱图
3.2干扰性试验 按处方比例，配制不含白芍的空白样品溶液，按测定方法测定，在与芍药苷对照品相同保留时间处未显示明显色谱峰，认为无干扰，见图1（C）。
3.3样品测定结果 对三批样品进行含量测定，测定方法见前，结果见表2。
表2 样品含量测定结果（n=3）
4讨论
4.1检测波长的选择 取对照品溶液，在200～400nm波长范围内进行扫描，结果显示芍药苷在243nm波长处有一特征吸收峰，这与文献报道一致，在此波长下阴性样品无干扰，因此，以此波长作为测定波长。
4.2提取溶剂的确定 根据文献及芍药苷的性质可知，芍药苷在水、不同浓度乙醇、甲醇中均有较好的溶解性能，取本品适量，精密加入100倍溶剂，超声提取测定，实验结果表明水及50%乙醇的提取量相近，但水提时含杂质成分较多，故采用50%乙醇为提取溶剂。
4.3提取时间的确定 根据文献综合考虑，选择超声为提取方法，对其超声时间进行考察，实验结果表明超声时间最好在15分钟以内，否则，超声时间长会对芍药苷有破坏作用，从而降低了其含量。
4.4试验结果表明 本方法简便、准确、可靠。可以用于本品的质量控制。■
参考文献
[1] 中华人民共和国国家药典委员会. 中华人民共和国药典[S]2000年版.北京：化学工业出版社，2000：一部78.
[2] 徐国钧主编.生药学[M]第二版.北京：人民卫生出版社，1997，111.
[3] 马涵涛，谢秀娟，张翠英.HPLC测定妇科消炎颗粒中芍药苷的含量[J].中华实用中西医杂志， 2003；16（5）：635.
[4] 葛萍，雷岁合，曹新宪.HPLC法测定益智壮骨冲剂中芍药甙的含量[J].中成药，1996，18（2）：13.
[5] 林伟忠.白芍及其复方制剂中芍药甙测定方法研究[J].中成药，1997；19（6）：43