【摘 要】
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为探究刚地弓形虫致密性颗粒蛋白(GRA)12和GRA14重组质粒的免疫效果,本研究构建了pcDNA3.1-GRA12和pcDNA3.1-GRA14重组质粒,经诱导表达后利用SDS-PAGE检测重组蛋白的表达情况,结果显示在48 ku和45 ku处分别出现大小相符的GRA12和GRA14蛋白条带.将重组质粒经肌肉注射单独免疫或联合免疫小鼠,首免后2周、4周、6周时采集血清,利用ELISA测定血清中的抗体水平,结果显示:pcDNA3.1-GRA12和pcDNA3.1-GRA14重组质粒免疫可以激活小鼠体液免疫
【机 构】
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江苏农牧科技职业学院宠物科技学院,江苏泰州225300;江苏华创信诺医药科技有限公司,江苏泰州225300;吉林大学动物医学学院,吉林长春130062
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为探究刚地弓形虫致密性颗粒蛋白(GRA)12和GRA14重组质粒的免疫效果,本研究构建了pcDNA3.1-GRA12和pcDNA3.1-GRA14重组质粒,经诱导表达后利用SDS-PAGE检测重组蛋白的表达情况,结果显示在48 ku和45 ku处分别出现大小相符的GRA12和GRA14蛋白条带.将重组质粒经肌肉注射单独免疫或联合免疫小鼠,首免后2周、4周、6周时采集血清,利用ELISA测定血清中的抗体水平,结果显示:pcDNA3.1-GRA12和pcDNA3.1-GRA14重组质粒免疫可以激活小鼠体液免疫反应,且较单独免疫组产生更高水平的IgG和IgG2a抗体;首免后42 d无菌采集各组小鼠脾脏,进行淋巴细胞增殖试验,结果显示,重组质粒免疫可以激活小鼠细胞免疫引起淋巴细胞增殖;利用IFN-γ和IL-4 ELISA试剂盒检测脾细胞培养上清中的细胞因子,结果显示,重组质粒免疫可以诱导Th1型细胞因子IFN-γ分泌,而对IL-4的分泌无显著影响.首免9周后对各组剩余小鼠进行攻虫,小鼠存活时间监测显示,未免疫纽小鼠于攻虫后第6d死亡,pcDNA3.1-GRA12单独免疫组延长小鼠存活至攻虫后13d,pcDNA3.1-GRA14单独免疫组延长小鼠存活至攻虫后16d,而pcDNA3.1-GRA12和pcDNA3.1-GRA14联合免疫可延长小鼠存活至攻虫后25 d.本研究首次利用刚地弓形虫GRA12和GRA14重组质粒免疫小鼠并进行保护性评价,证实GRA12和GRA14均为保护性抗原且二者联合免疫效果较单独免疫更佳,为弓形虫DNA疫苗开发提供新的靶点和疫苗免疫方式提供新思路.
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