【摘 要】
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目的 原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性.方法 用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对.选择与人类
【机 构】
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南京师范大学生命科学学院,南京210097;南京军区南京总医院临床中心实验科,南京210002;南京军区南京总医院临床中心实验科,南京,210002
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目的 原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性.方法 用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对.选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,PCR扩增Set1-208p的编码基因,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白质表达.用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊侵袭性白念珠菌感染(IC)患者血清进行抗原性鉴定.结果 成功克隆了白念珠菌抗原特异性H3K4甲基转移酶片段Set1-208p基因并诱导表达,获得了纯化的重组肽段,所得蛋白质分子量(Mr)约为29000,带有His标签,经western blot鉴定,诱导的重组蛋白可与IC患者血清特异性反应.结论 成功诱导表达了具有良好抗原反应性的Set1-208p重组蛋白质,为建立相应的抗原、抗体ELISA检测方法提供基础.
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