人泛素结合酶UbcH5c活性突变体的构建·纯化以及催化活性研究

来源 :安徽农业科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：guoyafeigood

【摘要】

：

[目的]构建人泛素结合酶UbcH5c的活性位点突变体S22R和F62A，同时分析这2种突变体蛋白与野生型蛋白在泛素化反应中的活性差异。I方法l通过点突变（Site-Directed Mutagenesis）的方

【作者】

：

张西轩李晔阮海华

【机构】

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天津市食品生物技术重点实验室

【出处】

：

安徽农业科学

【发表日期】

：

2014年3期

【关键词】

：

UbcH5c 泛素化修饰点突变 UbcH5c Ubiquitination Site-directed mutant

【基金项目】

：

国家自然科学基金（81101220）,天津市应用基础与前沿研究计划项目（12JCQNJC08100）,“十二五”天津市中青年骨干创新人才支持计划.

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[目的]构建人泛素结合酶UbcH5c的活性位点突变体S22R和F62A，同时分析这2种突变体蛋白与野生型蛋白在泛素化反应中的活性差异。I方法l通过点突变（Site-Directed Mutagenesis）的方法构建2种突变体质粒，利用0．5mmol／LIPTG分别诱导2种突变体蛋白在大肠杆菌中进行表达；将菌体超声破碎后，依次利用阳离子交换层析法对UbcI-ISe突变蛋白进行分离纯化，最后利用体外泛素化酶促反应结合蛋白免疫印迹杂交的方法分析野生型UbcH5c与其活性突变体UbcH5c S22R和UbcH5

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