易错PCR技术提高源于Sulfolobus acidocaldarius麦芽寡糖基海藻糖合成酶活性

来源 :食品与生物技术学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：jiu_yue9

【摘要】

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利用易错PCR技术结合高通量筛选技术对源于Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909的MTSase进行定向进化,获得一个酶活提高的突变体酶D-6。基因分析表明,突变体酶发生了2个位

【作者】

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姚锴琳宿玲恰吴敬

【机构】

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食品科学与技术国家重点实验室,江南大学生物工程学院,江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室

【出处】

：

食品与生物技术学报

【发表日期】

：

2020年3期

【关键词】

：

麦芽寡糖基海藻糖合成酶嗜酸热硫化叶菌易错PCR maltooligosyl trehalose synthaseSulfolobus acidocaldar

【基金项目】

：

国家自然科学基金项目(31771916),国家杰出青年科学基金项目(31425020),江苏高校优秀科技创新团队项目,111计划项目(111-2-06),江苏省研究科研与实践创新计划项目(KYCX17-1466)

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利用易错PCR技术结合高通量筛选技术对源于Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909的MTSase进行定向进化,获得一个酶活提高的突变体酶D-6。基因分析表明,突变体酶发生了2个位点突变:G432D/G586D,其中突变位点G586D位于Aβ8与AEα14的loop环上。将野生型MTSase和突变体酶D-6进行蛋白质纯化后,测定其酶学性质,结果表明:突变体酶D-6的比活力为野生型MTSase的1.22倍;野生型的Km值为4.74 mmol/L,而突变体D-6为2.77 mmo

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