【摘 要】
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目的 克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶（GDH），并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh，进行序列分析；构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh，
【机 构】
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南京师范大学生命科学学院,南京军区军事医学研究所流行病研究室
【基金项目】
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“十五”国家科技攻关计划“新发传染病的防治技术研究与应用”项目资助(2003BA712A03-05)
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目的 克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶（GDH），并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh，进行序列分析；构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh，转化E．coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，PAGE检测；通过亲和层析纯化，获得融合蛋白GST—GDH，用凝血酶剪切去除GST，获得完整的GDH纯化蛋白后测定其酶活性。结果 PCR法自猪链球菌菌株Habb基因组扩增出约1．3kb的目的片段；序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族I的典型保守
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