一种改进的大引物PCR定点诱变方法

来源 :中华医学遗传学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:swei830807
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的 建立一种改进的、简便易行的大引物 PCR定点诱变技术。方法 在两轮 PCR中设计了两种不同的质粒 DNA模板 ,两者分别缺少正向或反向外侧引物可结合的互补序列 ;当两种模板和两条外侧引物同时存在于一个反应管时 ,可以完全避免对野生型目的基因全长的扩增。第 1轮 PCR由正向外侧引物和突变引物合成大引物 ,这一产物无需凝胶纯化而直接用于第 2轮 PCR。第 2轮 PCR的第 1阶段由大引物延伸合成全长突变终产物 ,两条外侧引物则在第 2阶段指数扩增 ,所有终产物均含所需致突变位点。结果 用此方法对中国人 β地中海贫血 15种稀少突变类型进行定点诱变 ,并将诱变得到的全长人 β珠蛋白基因克隆到 p GEM○R- T载体后全长测序 ,所有克隆均鉴定为所需突变型。结论 这种改进的大引物PCR定点诱变技术省时、省工 ,诱变的成功率可达 10 0 % ,适于实验室常规应用。
其他文献
目的探讨玻璃体腔注射曲安奈德治疗脉络膜脱离型视网膜脱离的疗效及安全性。方法选择未经有效治疗的脉络膜脱离型视网膜脱离患者,于手术前经睫状体平坦部向玻璃体腔内注入曲
岷江上游历史文化资源非常富集,其代表性历史文化资源要而言之有五:大禹文化、蜀源文化、江源文化、羌族文化以及其他文化。但由于多方面原因,这一地区文化旅游发展相对滞后,
建筑史中空间概念的历史就是对空间知识的认识活动以及空间知识自身认识活动的历史。文章以谱系分析的方法,通过追索建筑史中典型的空间概念,论述了空间概念的形成、发展和衍
近年来 ,随着来华留学生的迅速增长 ,对外汉语教学也越来越受到重视 ,并已成为各高校外事工作的重要项目之一。对新直辖市重庆 ,此项工作意义非常 ,而作为重庆市高校教育领头
本文以自建的中国译者英译本语料库和英语原创小说语料库为类比研究对象,借助WordSmith Tools4.0等语料库检索分析工具,分别从词汇和句法层面考察中国译者英译本的翻译共性特
<正>该项目业主——挪威西海岸城市斯塔万格旅游局希望在城市北部的高山湖山地,毗邻著名的祈祷峰景区打造一片让儿童接近自然、感受自然的宿营地。挪威人有着与生俱来的和自
3年前,塔集供电所各项指标排名全省第499位,是全县排名倒数的一个乡镇供电所。为改变现状,我结合供电所自身特点,决定用文化渗透,让国网企业文化在基层落地生根,通过培育"和合
数学是人类文明的重要组成部分,从数学与理性精神、数学与各门科学、数学与计算机、数学与社会进步这四个方面进行深入探讨,有助于了解数学与人类文明的关系。
<正>这处隐于林间的小型生态旅舍仅为旅者提供17间体验式客房。4座高低错落的L形建筑以村落的形式聚集,形成通过曲折步道联接并面向山谷的系列半开放庭院。旅舍大量采用竹木
期刊