【摘 要】
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[目的]构建一个适于嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)的基因打靶载体,并分析转化四膜虫的特性.[方法]以嗜热四膜虫组蛋白H4-I基因作为启动子,利用H4-I基因的5′和3′侧翼
【基金项目】
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国家自然科学基金(30400332),江苏省自然科学基金创新人才项目(BK2003417)
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[目的]构建一个适于嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)的基因打靶载体,并分析转化四膜虫的特性.[方法]以嗜热四膜虫组蛋白H4-I基因作为启动子,利用H4-I基因的5′和3′侧翼区作为同源臂,并且保留H4-I基因编码区的起始密码子ATG和终止密码子TGA,中间嵌入巴龙霉素抗性标记基因neo,从而构建一个基因打靶载体.将该载体电击转化到嗜热四膜虫接合株体内,使其同源重组到四膜虫H4-I基因上.通过巴龙霉素抗性筛选、PCR扩增目的基因对抗性虫株进行鉴定.光学和电子显微镜观察抗性虫株形态
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