【摘 要】
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目的利用小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨分化模型,探讨miR-26a在成骨分化中的表达趋势及调控作用。方法提取雌性C57/BL6J小鼠双侧下肢股骨骨髓分离培养BMSCs,诱导分化为
【机 构】
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沈阳军区总医院口腔颌面外科,第四军医大学口腔医院组织工程中心,佳木斯大学口腔医学院口腔颌面外科
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目的利用小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨分化模型,探讨miR-26a在成骨分化中的表达趋势及调控作用。方法提取雌性C57/BL6J小鼠双侧下肢股骨骨髓分离培养BMSCs,诱导分化为成骨细胞,通过实时定量PCR检测miR-26a在BMSCs及其诱导分化细胞中的表达。使用miR-26a的促进物miR-RiboTMmicroRNA-26a mimics通过siPORTTMNeoFXTMagent转染试剂瞬时转染BMSCs并加入成骨诱导剂培养,同时设立转染microRNA-26a mimics NC的对照组。培养7 d、14 d后,进行细胞形态、碱性磷酸酶(ALP)染色、钙盐结节(茜素红染色)等项目的检测。另外制造绝经后骨质疏松小鼠模型(OVX组)与假手术动物模型(sham组),RT-PCR检测OVX组中miR-26a的表达。结果 miR-26a的表达在BMSCs向成骨分化过程中上升约25倍,成骨基因的表达也随着诱导时间的延长逐渐升高。转染miR-26a mimics后的BMSCs在培养7d后逐渐由梭形变为多角形,与阴性对照组类似;ALP染色显示阴性对照组培养7 d后为阳性,而实验组在培养7 d时呈强阳性;茜素红染色显示实验组培养14d后出现数量较多的钙盐沉积结节,而阴性对照组则较少。miR-26a mimics组成骨基因的表达均高于对照组。RT-PCR检测结果显示OVX组中miR-26a的表达低于sham组4倍。结论 miR-26a mimics的转染可以促进BMSCs的成骨分化潜能,在骨质疏松的环境中miR-26a表达下降,间接证实了miR-26a对小鼠BMSCs成骨潜能的促进作用。
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