探讨Gsh2基因沉默对胰腺癌SW1990细胞Hedgehog (Hh)通路关键成员Shh、Gli1基因表达的影响。
方法构建3个靶向Gsh2的shRNA(Gsh2-shRNA)，应用双酶切法插入质粒pLKO.1 puro，以未插入shRNA的空载质粒作为阴性对照。重组质粒经扩增后，抽提质粒DNA，通过双酶切后电泳分离和测序鉴定。然后转染胰腺癌SW1990细胞，应用实时RT-PCR法检测转染细胞Gsh2 mRNA表达，筛选沉默效果最佳的插入Gsh2-shRNA重组质粒。选择最佳重组质粒转染胰腺癌SW1990细胞，采用实时RT-PCR法和蛋白质印迹法检测转染细胞的Gsh2、Shh、Gli1 mRNA和蛋白表达量。
结果3个重组质粒经双酶切电泳及测序鉴定后证实插入的Gsh2-shRNA片段正确，符合预期。以转染空载质粒细胞的mRNA表达量为1，重组质粒Gsh2-shRNA-1、Gsh2-shRNA-2、Gsh2-shRNA-3转染细胞后Gsh2 mRNA表达量分别为0.41±0.02、0.22±0.043、0.53±0.03，以Gsh2-shRNA-2的沉默效应最佳。以转染空载质粒细胞的mRNA或蛋白表达量为1，转染Gsh2-shRNA-2细胞的Gsh2、Shh、Gli1 mRNA相对表达量分别为0.12±0.02、0.97±0.13、0.19±0.03；蛋白表达量为0.55±0.12、0.74±0.06、0.53±0.09。转染Gsh2-shRNA-2细胞的Gsh2、Gli1 mRNA及蛋白表达量较转染空载质粒细胞显著下调，差异均有统计学意义(P值均<0.01)，而Shh mRNA及蛋白表达量的差异无统计学意义。
结论Gsh2基因沉默可抑制胰腺癌SW1990细胞Hh通路成员Gli1的表达，而不影响Shh基因的表达。