【摘 要】
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目的 观察低氘水(DDW)对人黑色素瘤A375细胞增殖、迁移、凋亡的调控作用,并探讨相关机制.方法 A375细胞与人角质形成细胞HaCaT分别用氘体积分数为0.0025％、0.0050％、0.0100％的DDW和超纯水(氘体积分数0.0150％)配成的高糖DMEM培养基培养.采用细胞增殖实验和平板克隆形成实验检测A375细胞和Ha?CaT细胞的增殖能力,采用划痕实验检测两种细胞迁移能力,DAPI染色观察两种细胞形态变化.采用流式细胞仪检测A375细胞凋亡和细胞周期分布情况,ATP酶测试盒检测A375细胞N
【机 构】
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东莞市食品药品检验所,广东东莞523808;广东医科大学药学院;广东医科大学药学院
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目的 观察低氘水(DDW)对人黑色素瘤A375细胞增殖、迁移、凋亡的调控作用,并探讨相关机制.方法 A375细胞与人角质形成细胞HaCaT分别用氘体积分数为0.0025％、0.0050％、0.0100％的DDW和超纯水(氘体积分数0.0150％)配成的高糖DMEM培养基培养.采用细胞增殖实验和平板克隆形成实验检测A375细胞和Ha?CaT细胞的增殖能力,采用划痕实验检测两种细胞迁移能力,DAPI染色观察两种细胞形态变化.采用流式细胞仪检测A375细胞凋亡和细胞周期分布情况,ATP酶测试盒检测A375细胞Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、总ATP酶活性,采用Western blotting法检测A375细胞中的凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax)及Caspase通路蛋白(Caspase-3、cleaved Caspase-3、Caspase-9、cleaved Caspase-9、PARP、cleaved PARP).结果 与超纯水处理相比,0.0100％、0.0050％、0.0025％氘体积分数的DDW处理的A375细胞增殖抑制率依次增高,克隆形成率和细胞迁移率依次降低(P均<0.05);DDW处理的A375细胞出现核染色质固缩、凝聚、核碎裂等现象,细胞核中凋亡小体增多.DDW对HaCat细胞的增殖能力、集落形成能力、细胞迁移能力及细胞形态没有明显影响.与超纯水处理相比,0.0100％、0.0050％、0.0025％氘体积分数的DDW处理的A375细胞凋亡率及G0/G1期细胞比例依次增高,G2/M期细胞比例依次降低(P均<0.05).与超纯水处理相比,0.0100％、0.0050％、0.0025％氘体积分数的DDW处理的A375细胞Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、总ATP酶活性及Bcl-2、Caspase-9、PARP蛋白表达依次降低,Bax、cleaved Cas?pase-3/9、cleaved PARP蛋白表达依次增高(P均<0.05).结论 低氘水能选择性地抑制A375细胞增殖、迁移并诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性,而对人角质形成细胞无明显影响;低氘水的作用机制可能与抑制ATP酶活性、激活Cas?pase信号通路有关.
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