【摘 要】
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目的 探讨荧光染料PKH26在构建组织工程骨中作为细胞示踪剂的可行性.方法 取1周龄新西兰大白兔骨髓分离培养BMSCs,以PKH26标记第3代BMSCs,荧光显微镜观察并采用流式细胞仪检
【机 构】
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中国辐射防护研究院山西省医用组织库,太原,030006
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目的 探讨荧光染料PKH26在构建组织工程骨中作为细胞示踪剂的可行性.方法 取1周龄新西兰大白兔骨髓分离培养BMSCs,以PKH26标记第3代BMSCs,荧光显微镜观察并采用流式细胞仪检测标记率:以成骨诱导培养基诱导标记后BMSCs向成骨细胞分化,倒置相差显微镜观察诱导后7、14 d细胞形态变化,并于14 d采用钙钴法检测ALP活性,茜素红矿化结节染色观察诱导结果.将PKH26标记的BMSCs接种子生物衍生骨材料,48 h后荧光显微镜观察细胞与材料的复合情况:将细胞-材料复合物植入成年新西兰大白兔双后肢肌袋,14、28 d后荧光显微镜观察标记细胞的转归. 结果 荧光显微镜观察PKH26标记的BMSCs呈球形,呈现均匀分布的红色荧光;培养24 h后细胞贴壁伸展,轮廓清晰可见.流式细胞仪检测细胞染色阳性率达97.2%.经成骨诱导后,细胞由长梭形变为多边形或立方形,ECM分泌增多,ALP及茜素红染色均呈阳性反应.PKH26标记细胞与生物衍生骨材料复合培养48 h后,荧光显微镜观察可见材料表面及内部发出红色荧光.标记细胞.支架材料复合物植入肌袋后14 d,在植入区可见发出红色明亮荧光的标记细胞;术后28 d,在植入区仍可见发出红色荧光的细胞,但数量较14 d时少,荧光强度也较弱. 结论 PKH26标记BMSCs可作为一种体外构建组织工程骨及短期体内示踪的有效手段.
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