【摘 要】
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目的 探讨鱼藤素对急性髓系白血病(AML)KG-1a细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法 将对数生长期KG-1a细胞随机分为0.00 nmol·L-1鱼藤素组、10.00 nmol·L-1鱼藤素组、20.00 nmol·L-1鱼藤素组、40.00 nmol·L-1鱼藤素组、80.00 nmol·L-1鱼藤素组,分别用含有0.00、10.00、20.00、40.00、80.00 nmol·L-1鱼藤素的培养基培养.鱼藤素干预48 h后,采用倒置显微镜观察5组细胞的形态学变化.采用二甲基噻唑(MTT)实验检测5组
【机 构】
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河南科技大学第一附属医院/河南科技大学临床医学院血液内科,河南 洛阳 471000
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目的 探讨鱼藤素对急性髓系白血病(AML)KG-1a细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法 将对数生长期KG-1a细胞随机分为0.00 nmol·L-1鱼藤素组、10.00 nmol·L-1鱼藤素组、20.00 nmol·L-1鱼藤素组、40.00 nmol·L-1鱼藤素组、80.00 nmol·L-1鱼藤素组,分别用含有0.00、10.00、20.00、40.00、80.00 nmol·L-1鱼藤素的培养基培养.鱼藤素干预48 h后,采用倒置显微镜观察5组细胞的形态学变化.采用二甲基噻唑(MTT)实验检测5组细胞增殖能力.另取对数生长期KG-1a细胞随机分为空白组、鱼藤素组、氯化锂(LiCl)组、鱼藤素+LiCl组,空白组细胞用正常培养基培养,鱼藤素组细胞用含80.00 nmol·L-1鱼藤素的培养基干预72 h,LiCl组细胞用含30 mmol·L-1 LiCl的培养基干预72 h,鱼藤素+LiCl组细胞用含80.00 nmol·L-1鱼藤素和30 mmol·L-1 LiCl的培养基干预72 h.采用流式细胞术检测4组细胞凋亡情况及细胞周期分布.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测4组细胞S期激酶相关蛋白2(SKP2)、β-链接素(β-catenin)、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)mRNA相对表达量.采用Western blot法检测4组细胞中SKP2、β-catenin、PARP蛋白相对表达量.结果 鱼藤素干预48 h时,与0.00 nmol·L-1鱼藤素组比较,10.00 nmol·L-1鱼藤素组、20.00 nmol·L-1鱼藤素组、40.00 nmol·L-1鱼藤素组、80.00 nmol·L-1鱼藤素组细胞间隙增大,细胞数量显著减少,形态不规则,细胞核固缩、碎片增加,且随着鱼藤素药物干预浓度的增加,细胞数量逐渐减少,形态变化逐渐明显.鱼藤素干预24、48、72 h时,10.00 nmol·L-1鱼藤素组、20.00 nmol·L-1鱼藤素组、40.00 nmol·L-1鱼藤素组、80.00 nmol·L-1鱼藤素组细胞增殖能力显著低于0.00 nmol·L-1鱼藤素组(P<0.05),20.00 nmol·L-1鱼藤素组、40.00 nmol·L-1鱼藤素组、80.00 nmol·L-1鱼藤素组细胞增殖能力显著低于10.00 nmol·L-1鱼藤素组(P<0.05),40.00 nmol·L-1鱼藤素组、80.00 nmol·L-1鱼藤素组细胞增殖能力显著低于20.00 nmol·L-1鱼藤素组(P<0.05),80.00 nmol·L-1鱼藤素组细胞增殖能力显著低于40.00 nmol·L-1鱼藤素组(P<0.05);鱼藤素干预24、48、72 h时,5组细胞的增殖能力均随培养时间延长显著降低,组内各时间点之间两两比较差异有统计学意义(P<0.05).空白组、鱼藤素组、LiCl组、鱼藤素+LiCl组细胞凋亡率分别为(5.37±0.61)％、(34.89±4.57)％、(2.54±0.36)％、(21.10±4.69)％;空白组、LiCl组、鱼藤素+LiCl组细胞凋亡率显著低于鱼藤素组(P<0.05);空白组、LiCl组细胞凋亡率均显著低于鱼藤素+LiCl组;LiCl组细胞凋亡率均显著低于空白组(P<0.05).空白组、鱼藤素+LiCl组、鱼藤素组的G0/G1细胞占比显著低于LiCl组,G2/M细胞占比显著高于LiCl组(P<0.05);鱼藤素+LiCl组、鱼藤素组的G0/G1细胞占比显著低于空白组,G2/M细胞占比显著高于空白组(P<0.05);鱼藤素组的G0/G1细胞占比显著低于鱼藤素+LiCl组,G2/M细胞占比显著高于鱼藤素+LiCl组(P0.05).空白组、鱼藤素+LiCl组、鱼藤素组细胞SKP2、β-catenin、PARP mRNA及蛋白相对表达量显著低于LiCl组(P<0.05),鱼藤素+LiCl组、鱼藤素组细胞SKP2、β-catenin、PARP mRNA及蛋白相对表达量显著低于空白组(P<0.05),鱼藤素组细胞SKP2、β-catenin、PARP mRNA及蛋白相对表达量显著低于鱼藤素+LiCl组(P<0.05).结论 鱼藤素对AML KG-1a细胞具有增殖抑制、细胞周期阻滞及凋亡促进作用,其作用机制可能与抑制SKP2、β-catenin、PARP表达有关.
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