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摘要：以朱顶红苏红的母株小鳞茎为外植体，通过在培养基中添加不同浓度组合的生长调节物质与抗褐化、污染的紫薯提取液、甲基紫提高增殖系数、降低褐化与污染。结果表明：在MS 6-BA 2.0 mg/L、NAA 0.01 mg/L 0.01 g/L 甲基紫培养基中，增殖系数最高，可达11.4，并能有效控制真菌污染和褐化。在继代培养1～13代时，增殖系数基本保持在9～11，继代14次以后增殖系数明显降低。
关键词：朱顶红苏红；离体增殖技术；甲基紫；褐化现象；增殖系数；外植体；生长调节；真菌污染；继代培养
中图分类号： S682.2 50.4 3 文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2015）03-0036-02
朱顶红为石蒜科朱顶红属多年生鳞茎类草本植物，近几年作为高档盆栽花卉品种的种球都从国外引进[1]，我国缺少自主知识产权的品种与配套的规模化离体繁殖技术。苏州农业职业技术学院长期从事朱顶红品种资源引进与选育研究，近年从杂交后代中筛选出一批优良单株，通过分生扩繁形成株系，有些品系通过了江苏省农作物品种审定委员会的鉴定，其中朱顶红新品种苏红（Hippeastrum hybridumcv.Suhong）以其花大色艳且重瓣而深受市场青睐，因此离体快繁技术成为该新品种种球生产的关键技术。本试验通过对朱顶红新品种苏红离体增殖技术研究，为朱顶红种球的大量繁殖提供技术依据。
1 材料与方法
1.1 材料
外植体材料取自朱顶红新品种苏红种球，该品种花色草莓红（RAL3018）和纯白色（RAL9010）相间，重瓣，花瓣18～20瓣，冠径18 cm，小花数4朵，株高32 cm，花期4—5月。试验在苏州农业职业技术学院相城科技园组培室内进行。
1.2 方法
1.2.1 初代培养
春季取母球侧边新长出的小籽球，洗净，剥除外层的鳞片，保留1～2张长约2 cm的嫩叶，用洗衣粉将鳞茎清洗干净后，在流水下冲洗1 h，用滤纸吸干表面水分后进行初代消毒处理，在超净工作台上用75%乙醇浸泡30 s，倒出乙醇，再倒入0.1%氯化汞浸泡12 min，用无菌水清洗5次，将小籽球的鳞茎横切成带鳞茎盘的0.5 cm小块接入初代培养基MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L中，在培养室中培养[2]，平均50 d转接1次，经3次同一培养基转接培养，球径长至0.4～0.5 cm时转入增殖培养基中，培养条件为：温度（25±1） ℃，光照12 h/d，光照度3 000 lx 左右。
1.2.2 继代（增殖）培养
将初代培养的小球茎转入添加不同生长调节物浓度的增殖培养基（MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L、MS 6-BA 3.0mg/L NAA 0.01mg/L、MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L、MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L）中，将初代培养的种球按四分法切割，每小切块带有部分鳞茎盘，50 d后对增殖系数与发生根数进行统计。每瓶增殖系数=增殖后球茎发生数量/接种数，每处理统计10瓶，用于數据分析。
1.2.3 紫薯提取液制作与甲基紫添加方法
紫薯提取液制作方法参考Lu等的方法[3]并进行改良。称取250 g紫薯 750 g纯净水，先将称好的紫薯微波炉煮熟，紫薯和纯净水混合煮沸10 min，将紫薯碾碎后与同煮的水混合，用80目筛过滤混合液，得过滤液400 mL。紫薯液添加量分别为0、50、150、200 mL/L，加入增殖培养基中备用，用增殖培养基添加0.01 g/L甲基紫作为对照，每处理50瓶，转接30 d后对培养瓶苗的污染与褐化率进行统计，50 d后统计增殖生长情况。
2 结果与分析
2.1 不同生长调节剂对鳞茎增殖的影响
把鳞茎切割小块转接在添加不同生长调节剂的增殖培养基中进行培养，结果见表1。表1显示，增殖培养基MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L、MS 6-BA 3.0 mg/L NAA 0.01 mg/L、MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L中培养的鳞茎增殖系数差异不显著（P>0.05），其中培养基MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L中鳞茎的增殖系数最高，为11.0，但根数最少，为0.2条，根系细弱；培养基MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L中的增殖系数最低，为3.8，而平均根条数最多，为4.9条，且根系粗壮，与MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L、MS 6-BA 3.0 mg/L NAA 001 mg/L、MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L增殖培养基中鳞茎增殖系数差异显著。由此可以看出，初代培养基 MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L已不适宜继续用于增殖培养中。
在培养基MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L、MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L中的细胞分裂素6-BA的浓度相同，提高生长素NAA的浓度则不利于增殖系数的提高，即在增殖培养中产生的根系越少，鳞茎的增殖系数越高，NAA应该控制在0.01 mg/L。增殖培养基MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L、MS 6-BA 3.0 mg/L NAA 001 mg/L中培养的鳞茎增殖系数和根数差异不显著（P>005），可见细胞分裂素6-BA浓度的提高并不利于鳞茎的增殖，还出现了小球的玻璃化现象，因此增殖培养的最佳配方为MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L。
2.2 紫薯提取液、甲基紫对增殖培养的影响
关键词：朱顶红苏红；离体增殖技术；甲基紫；褐化现象；增殖系数；外植体；生长调节；真菌污染；继代培养
中图分类号： S682.2 50.4 3 文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2015）03-0036-02
朱顶红为石蒜科朱顶红属多年生鳞茎类草本植物，近几年作为高档盆栽花卉品种的种球都从国外引进[1]，我国缺少自主知识产权的品种与配套的规模化离体繁殖技术。苏州农业职业技术学院长期从事朱顶红品种资源引进与选育研究，近年从杂交后代中筛选出一批优良单株，通过分生扩繁形成株系，有些品系通过了江苏省农作物品种审定委员会的鉴定，其中朱顶红新品种苏红（Hippeastrum hybridumcv.Suhong）以其花大色艳且重瓣而深受市场青睐，因此离体快繁技术成为该新品种种球生产的关键技术。本试验通过对朱顶红新品种苏红离体增殖技术研究，为朱顶红种球的大量繁殖提供技术依据。
1 材料与方法
1.1 材料
外植体材料取自朱顶红新品种苏红种球，该品种花色草莓红（RAL3018）和纯白色（RAL9010）相间，重瓣，花瓣18～20瓣，冠径18 cm，小花数4朵，株高32 cm，花期4—5月。试验在苏州农业职业技术学院相城科技园组培室内进行。
1.2 方法
1.2.1 初代培养
春季取母球侧边新长出的小籽球，洗净，剥除外层的鳞片，保留1～2张长约2 cm的嫩叶，用洗衣粉将鳞茎清洗干净后，在流水下冲洗1 h，用滤纸吸干表面水分后进行初代消毒处理，在超净工作台上用75%乙醇浸泡30 s，倒出乙醇，再倒入0.1%氯化汞浸泡12 min，用无菌水清洗5次，将小籽球的鳞茎横切成带鳞茎盘的0.5 cm小块接入初代培养基MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L中，在培养室中培养[2]，平均50 d转接1次，经3次同一培养基转接培养，球径长至0.4～0.5 cm时转入增殖培养基中，培养条件为：温度（25±1） ℃，光照12 h/d，光照度3 000 lx 左右。
1.2.2 继代（增殖）培养
将初代培养的小球茎转入添加不同生长调节物浓度的增殖培养基（MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L、MS 6-BA 3.0mg/L NAA 0.01mg/L、MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L、MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L）中，将初代培养的种球按四分法切割，每小切块带有部分鳞茎盘，50 d后对增殖系数与发生根数进行统计。每瓶增殖系数=增殖后球茎发生数量/接种数，每处理统计10瓶，用于數据分析。
1.2.3 紫薯提取液制作与甲基紫添加方法
紫薯提取液制作方法参考Lu等的方法[3]并进行改良。称取250 g紫薯 750 g纯净水，先将称好的紫薯微波炉煮熟，紫薯和纯净水混合煮沸10 min，将紫薯碾碎后与同煮的水混合，用80目筛过滤混合液，得过滤液400 mL。紫薯液添加量分别为0、50、150、200 mL/L，加入增殖培养基中备用，用增殖培养基添加0.01 g/L甲基紫作为对照，每处理50瓶，转接30 d后对培养瓶苗的污染与褐化率进行统计，50 d后统计增殖生长情况。
2 结果与分析
2.1 不同生长调节剂对鳞茎增殖的影响
把鳞茎切割小块转接在添加不同生长调节剂的增殖培养基中进行培养，结果见表1。表1显示，增殖培养基MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L、MS 6-BA 3.0 mg/L NAA 0.01 mg/L、MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L中培养的鳞茎增殖系数差异不显著（P>0.05），其中培养基MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L中鳞茎的增殖系数最高，为11.0，但根数最少，为0.2条，根系细弱；培养基MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L中的增殖系数最低，为3.8，而平均根条数最多，为4.9条，且根系粗壮，与MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L、MS 6-BA 3.0 mg/L NAA 001 mg/L、MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L增殖培养基中鳞茎增殖系数差异显著。由此可以看出，初代培养基 MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L已不适宜继续用于增殖培养中。
在培养基MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L、MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.1 mg/L中的细胞分裂素6-BA的浓度相同，提高生长素NAA的浓度则不利于增殖系数的提高，即在增殖培养中产生的根系越少，鳞茎的增殖系数越高，NAA应该控制在0.01 mg/L。增殖培养基MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L、MS 6-BA 3.0 mg/L NAA 001 mg/L中培养的鳞茎增殖系数和根数差异不显著（P>005），可见细胞分裂素6-BA浓度的提高并不利于鳞茎的增殖，还出现了小球的玻璃化现象，因此增殖培养的最佳配方为MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L。
2.2 紫薯提取液、甲基紫对增殖培养的影响