人肝癌SMMC-7721细胞热休克反应时糖皮质激素受体mRNA减少机制初探

来源 :中华内分泌代谢杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ceng0606
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目的探讨人肝癌SMMC-7721细胞热休克反应时糖皮质激素受体(GR)mRNA减少的机制.方法利用聚合酶链反应(PCR)从大鼠GR cDNA质粒及人肝癌SMMC 7721细胞基因组中扩增大鼠GR跨外显子3,4,5片段(与人GR跨外显子3,4,5片段同源性在89%以上)及人GR内含子E的DNA片段,构建转录质粒,并在体外进行转录,用地高辛标记反义RNA探针,进行细胞原位杂交,碱性磷酸酶底物NBT-BCIP显色,计算机图像分析系统进行扫描半定量分析.结果人肝癌SMMC-7721细胞44℃培养1h后,用跨外显子和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比未经热休克反应组低;加放线菌素D后热休克反应组,用跨外显子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组低,而用内含子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组高;加放线菌酮后热休克反应组,用跨外显子探针和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比热休克反应组高.结论热休克反应时GR mRNA转录过程受抑,GR mRNA前体成熟过程存在剪接障碍,GR mRNA降解加快.

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