【摘 要】
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目的:观察益肾通癃汤对人前列腺癌DU-145细胞上皮-间质转化(EMT)及Ras/ERK信号通路的影响并探讨其作用机制.方法:将人前列腺癌DU-145细胞分为空白血浆组,益肾通癃汤含药血浆高、中、低剂量组(以下简称中药高、中、低剂量组).运用CCK-8法观察各组DU-145细胞增殖情况,Annexin V&PI双染色法进行细胞凋亡检测,PI法进行细胞周期检测,Transwell小室及划痕实验法检测各组DU-145细胞侵袭能力及迁移情况,Western印迹检测益肾通癃汤干预后各组DU-145细胞EMT及Ra
【机 构】
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湖南中医药大学研究生院,湖南长沙410000;湖南中医药大学第一附属医院中医外科,湖南长沙410008;湖南中医药大学研究生院,湖南长沙410000;湖南中医药大学第一附属医院中医外科,湖南长沙410
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目的:观察益肾通癃汤对人前列腺癌DU-145细胞上皮-间质转化(EMT)及Ras/ERK信号通路的影响并探讨其作用机制.方法:将人前列腺癌DU-145细胞分为空白血浆组,益肾通癃汤含药血浆高、中、低剂量组(以下简称中药高、中、低剂量组).运用CCK-8法观察各组DU-145细胞增殖情况,Annexin V&PI双染色法进行细胞凋亡检测,PI法进行细胞周期检测,Transwell小室及划痕实验法检测各组DU-145细胞侵袭能力及迁移情况,Western印迹检测益肾通癃汤干预后各组DU-145细胞EMT及Ras/ERK信号通路相关蛋白的表达变化,RT-PCR检测DU-145细胞EMT及Ras/ERK信号通路相关蛋白的基因表达情况.结果:与空白血浆组对比,中药高、中、低剂量组均可显著抑制DU-145细胞增殖,降低其贴壁生长能力并呈剂量依赖性(P＜0.05,P＜0.01);中药高、中、低剂量组可显著促进人前列腺癌DU-145细胞凋亡并呈剂量依赖性(P＜0.01);中药高、中、低剂量组可显著调控DU-145细胞周期并呈剂量依赖性(P ＜0.05,P＜0.01);中药高、中、低剂量组可显著降低人前列腺癌DU-145细胞体外侵袭、迁移能力并呈剂量依赖性(P＜0.05);Western印迹结果显示,与空白血浆组比较,中药高、中、低剂量组人前列腺癌DU-145细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin)、锌指转录因子(Snail)、Ras、p-ERK1/2、ERK1/2、基质金属蛋白酶(MMP-9)等蛋白表达均存在一定程度的下调,而E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达上调并存在显著差异(P＜0.05,P＜0.01);RT-PCR结果显示,中药高、中、低剂量人前列腺癌DU-145细胞N-cadherin mRNA、Ras、ERK1表达下调,而E-cadherin mRNA表达上调并存在显著差异(P＜0.05,P＜0.01).结论:益肾通癃汤能够有效抑制人前列腺癌DU-145细胞的增殖并促进其凋亡,调控细胞周期,抑制其侵袭及迁移能力及EMT进程,益肾通癃汤治疗前列腺癌的作用机制可能是通过抑制前列腺癌细胞EMT进程及Ras/ERK信号通路表达有关.
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