人Lipocalin型前列腺素D合酶的克隆表达及其抗体制备

来源 :复旦学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:lebaishi310
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目的研究人Lipocalin型前列腺素D合酶(L-PGDS)的编码蛋白质在大肠杆菌中的表达,进一步制备抗L-PGDS编码蛋白质的多克隆抗体。方法用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法克隆L-PGDS基因蛋白编码序列。构建该基因的表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,SDS-PAGE分析表达的蛋白质。用RediPackGST亲和层析柱纯化的蛋白质免疫BALB/c小鼠制备多抗。结果RT-PCR所分离的L-PGDS基因蛋白编码序列,经测序证明与基因库所报道的L-PGDS的基因序列完全一致。SDS-PAGE分析证实该基因编码的蛋白质在大肠杆菌中表达,并获得效价为1∶6400的多克隆抗体。结论L-PGDS基因编码蛋白质能够在原核细胞中表达,并能获得抗L-PGDS基因编码蛋白质的多克隆抗体,为进一步深入研究该蛋白质的结构与功能打下了基础。
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