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目的建立HPLC测定苏木中巴西苏木素和原苏木素B含量的方法。方法色谱柱为Agilent Zorbax XDB C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%醋酸(20:80),流速为1.0mL·min-1,检测波长为280nm。结果巴西苏木素和原苏木素B的线性范围均为0.025~0.50mg·mL-1,r均为0.9994;平均回收率分别为95.44%(RSD=2.57%)和94.69%(RSD=1.38%)。结论新建方法简单、快速、准确,适用于苏木中巴西苏木素和原苏木素B的含量测定。