新城疫病毒V和W基因在DF-1细胞中的真核表达

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采用2轮PCR扩增获得新城疫病毒疫苗株LaSota和强毒株GM V和W基因全长,分别克隆到pMD19-T载体上,然后亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1,重组质粒经过酶切,PCR鉴定及测序,筛选出阳性重组质粒,分别命名为pEGFP-La V、pEGFP-La W、pEGFP-GM V和pEGFP-GM W。将各重组质粒分别转染到DF-1细胞,于转染后12、24h和36h在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白GFP在细胞中的表达情况。结果显示,各质粒转染DF-1细胞后在12h就可以见到绿色荧光蛋白,随着时间的延长,绿色荧光蛋白荧光强度增加,到36h后达到最强,而对照组始终没有见到GFP蛋白的表达,表明在转染的阳性细胞中融合蛋白pEGFP-La V、pEGFP-La W、pEGFP-GM V和pEGFP-GM W均能够有效的表达,该结果为新城疫病毒V和W基因的功能研究奠定了基础。
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