【摘 要】
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目的探索一种巴斯德毕赤酵母表达体系外源基因整合数的高通量定量分析方法.方法采用基因工程技术构建pPIC9K-HG质粒作为定量标准品,建立毕赤酵母基因组外源基因整合的高通量
【机 构】
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第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室,重庆医科大学医学检验系
【基金项目】
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国家科技部创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室开放基金资助项目（2003）
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目的探索一种巴斯德毕赤酵母表达体系外源基因整合数的高通量定量分析方法.方法采用基因工程技术构建pPIC9K-HG质粒作为定量标准品,建立毕赤酵母基因组外源基因整合的高通量定量PCR分析方法,用灵敏度、特异性等对方法进行评价,将之初步用于hA20基因毕赤酵母转化子外源基因整合数的分析.同时对3种酵母基因组制备方法进行了比较.结果方法灵敏度达10^3拷贝,线性范围在10^4～10^9,平均变异系数6.62%,特异性100%.14株hA20基因毕赤酵母转化子外源基因整合数分析显示,成功收获外源基因整合数为单拷贝
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