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目的 构建表达人类白细胞抗原-G (HLA-G)基因shRNA载体,探讨其对NK细胞杀伤效应的影响.方法 构建4个HLA-G-shRNA真核表达质粒,瞬时转染至人肝癌Bel-7402细胞,检测HLA-G mRNA和蛋白水平的表达.将NK-92MI细胞(效应细胞)与转染后的Bel-7402细胞(靶细胞)共同培养,以LDH释放法观察不同效靶比时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应.结果 经酶切及测序鉴定证实,插入序列与设计的序列相符.RT-PCR和Western blot结果均表明重组载体抑制了Bel-7402细胞HLA-G基因的表达.NK-92MI细胞对转染HLA-GshRNA的Bel-7402细胞杀伤作用明显增强(P＜0.01).封闭NK-92MI细胞KIR2DL4受体后,杀伤作用减弱(P＜0.01).结论 成功构建了HLA-G shRNA载体,下调HLA-G可以增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应,HLA-G与NK细胞表面KIR2DL4受体结合后,向NK细胞传递抑制效应.