【摘 要】
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目的 构建以SM22α启动子驱动EGFP表达的慢病毒载体,研究此载体在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中表达的效率和特异性.方法 从小鼠的基因组中采用PCR
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科,华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科,华中科技大学同济医学院附属协和医院血管外科
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目的 构建以SM22α启动子驱动EGFP表达的慢病毒载体,研究此载体在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中表达的效率和特异性.方法 从小鼠的基因组中采用PCR扩增SM22α启动子,将目的基因连接至T载体,并进行测序鉴定,将目的基因重组至pGC-FU载体,三质粒系统采用脂质体介导转染293T细胞进行病毒包装,体外感染VSMCs,大鼠动脉内皮细胞,人乳腺癌细胞系SK-BR-3,荧光显微镜观察EGFP的表达情况.结果 PCR扩增得到的SM22α启动子经测序证实正确;成功构建了SM22α启动子驱动EGFP的慢病毒载体LV-SM22α-EGFP,SM22α启动子能调控EGFP在VSMCs中高效表达,感染效率在95%以上,在血管内皮细胞和人乳腺癌细胞系SK-BR-3中不表达,对照慢病毒组EGFP在三种细胞中均表达,在VSMCs的感染效率在30%左右,且表达较低.结论 SM22α启动子能够特异性驱动EGFP在VSMCs中表达,LV-SM22α-EGFP能作为研究血管疾病的良好基因转移载体.
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