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设计1对引物从含有乙型脑炎病毒NS1基因的质粒pNS1上亚克隆NS1基因,将NS1基因插入到中间转移载体pUSK中,获得重组中间转移质粒pUSK-NS1.将pUSK-NS1与伪狂犬病毒Ea株TK /gG /LacZ+突变株基因组共转染真核细胞IBRS-2,通过空斑纯化得到了乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒株TK /gG /NS1+.经检测,重组病毒能表达具有生物活性的NS1蛋白.该重组病毒可作为猪乙型脑炎和伪狂犬病双价基因工程疫苗用毒株.