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设计合成3条引物,以载体pcDNA3.1-hAchE为模板,扩增出两端带有EcoRⅠ的约1.8 kb 去除信号肽但保留18 bp分子内伴侣序列的hAchE结构基因,及去除信号肽序列与分子内伴侣序列的hAchE成熟肽基因.将两个基因插入到酵母分泌型表达载体pPIC9和pHIL-S1,获得正向插入的4个分泌型酵母表达载体.为转化酵母,筛选分泌型高效表达hAchE菌株奠定了基础.