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用内切酶SacI和HindⅢ双酶切大肠杆菌质粒pEWD299,回收505bp的LTB基因片段,再次载体pUC18用SacI和HindⅢ双酶切,最后将pUC18DNA与505bp的LTBDNA进行连接,转化至受体菌DH5a中,经SacI/HindⅢ酶切反应鉴定重组子,得到了理想重组子质粒pXLT1。再将pXLT1进行EcoR酶切,大肠杆菌聚合酶IKlenow大片段补平,HindⅢ酶切处理,然后与用H